[發明專利]谷子酶活性的測定方法

在審

• 申請號: 201810451879.X
• 申請日: 2018-05-12
• 公開（公告）號: CN108753915A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 郭世華;李強;李濤;白玉婷;任芹勇;高媛;李星聰;王參觀
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種谷子酶活性的測定方法，涉及農業生物技術領域。本發明方法包括：將谷子開花期第12天設為取樣第1天，依次在取樣第3天、第5天、第10天、第15天、第20天、第25天及第30天分別采集幼穗作為待測樣品；利用液氮研磨所述待測樣品，稱取預設重量的待測樣品，利用試劑盒提純待測酶；利用紫外分光光度計測定所述待測酶的酶活性，得到所述谷子的酶活性數據。本發明方法測定酶活性結果準確、操作簡單；可為粳糯谷子胚乳形成期轉錄組序列分析、篩選淀粉合成通路粳糯谷子差異表達基因提供材料依據。

技術領域

本發明涉及農業生物技術領域，尤其涉及一種谷子酶活性的測定方法。

背景技術

測定稻谷酶活性的方法很多，如在開花后的多個時間段內分別采取稻穗樣品，然后液氮 冷凍和低溫保存；或者在稻穗中上部采取籽粒同樣液氮冷凍和低溫保存，然后再進行酶活性 測定。在上述測量酶活性方法中，均需要將玉米、水稻等作物外殼麩皮剝掉，在剝離過程中， 速凍樣品會融化，對酶活性會造成影響，最終會導致測量誤差。而且，在水稻和玉米等禾本 科作物測定酶活性時主要參照Nakamura(1989)等方法，此方法操作難度大，受外界影響因 素過多，測定結果誤差較大。

對于上述影響測定結果的各種問題，還未有相對詳細可行且科學的解決方法。

發明內容

有鑒于此，本發明實施例提供了一種谷子酶活性的測定方法，主要解決測定方法不準確 的問題。

為達到上述目的，本發明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發明實施例提供了一種谷子酶活性的測定方法，包括如下步驟：

將谷子開花期第12天設為取樣第1天，依次在取樣第3天、第5天、第10天、第15 天、第20天、第25天及第30天分別采集幼穗作為待測樣品；

利用液氮研磨所述待測樣品，稱取預設重量的待測樣品，利用試劑盒提純待測酶；

利用紫外分光光度計測定所述待測酶的酶活性，得到所述谷子的酶活性數據。

作為優選，所述酶為顆粒型淀粉合成酶、淀粉分支酶及可溶性淀粉合成酶。

作為優選，所述采集幼穗具體方式為：利用剪刀剪取谷穗的穗中部穗碼作為待測樣品， 先將所述待測樣品置于液氮罐中保存2小時后再轉入-80℃冰箱中保存。

作為優選，所述谷子為粳性品種赤谷4號和糯性品種公谷68號。

作為優選，所述待測樣品的預設重量為0.1g。

作為優選，所述試劑盒為蘇州科銘生物技術有限公司的試劑盒SSS-2A-Y、GBSS-2A-Y 或SBE-2-Y。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明對谷子取樣時間進行了優化：將谷子花期第12天左右作為取樣的第1天，取樣 時間點為12d、15d、18d、22d、27d、32d、37d、42d，取樣時間點分別不均勻，前期取樣密集，更有利于觀測酶的動態變化；本發明對谷子樣本的預處理方式進行了優化：調整了樣品質量，用量只需0.1g，帶殼研磨稱量，保證了樣品酶活性，樣品不會因為吸濕對質量產生影響；本發明挑選了蘇州科銘生物技術有限公司的試劑盒進行酶純化，該試劑盒對實驗條件要 求較低，操作簡單，反應靈敏且準確度高；本發明通過對測量方法中各步驟進行優化后，獲 得的各酶活性數據準確，為作物生長提供了可靠的理論依據。

附圖說明

圖1是本發明實施例1提供的顆粒結合型淀粉合成酶(GBSSⅠ)活性動態變化圖；

圖2是本發明實施例1提供的可溶性淀粉合成酶(SSS)活性動態變化圖；

圖3是本發明實施例1提供的淀粉分支酶(SBE)活性動態變化圖。