[發(fā)明專利]一種快速富集水產(chǎn)蛋白水解液中抗菌肽的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810432690.6
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108642114A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋茹;韋榮編
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/22
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

一種快速富集水產(chǎn)蛋白水解液中抗菌肽的方法，所述的水產(chǎn)蛋白水解液通過負(fù)電荷型磁性介孔微球定向富集并濃縮制備水產(chǎn)蛋白水解液中、主要包含精氨酸、組氨酸和賴氨酸殘基的抗菌肽；它基于大多數(shù)水產(chǎn)蛋白抗菌肽帶有正電荷，且電荷數(shù)越高其抗菌作用越強的特性，以磁性Fe3O4為基質(zhì)制備磁性氧化硅介孔微球，提高微球表面吸附面積，然后通過化學(xué)反應(yīng)將負(fù)電荷鍵合在磁性介質(zhì)微球表面，制備出的負(fù)電荷型磁性介質(zhì)微球，該微球可以特異性吸附水產(chǎn)蛋白水解液中帶有精氨酸、組氨酸和賴氨酸殘基的抗菌肽類；具有制備方法簡單，成本低，且能夠大規(guī)模生產(chǎn)，提高制備效率等特點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是一種快速富集水產(chǎn)蛋白水解液中抗菌肽的方法。

背景技術(shù)

水產(chǎn)蛋白通過外源蛋白酶水解方式可以得到具有抗菌活性的蛋白水解液，但是水產(chǎn)蛋白水解液中肽種類繁多，傳統(tǒng)的分離純化方式獲取目標(biāo)抗菌肽工序繁瑣，成本高，不適用于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)抗菌肽。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種抗菌肽的制備方法簡單，成本低，且能夠大規(guī)模生產(chǎn)，提高制備效率的快速富集水產(chǎn)蛋白水解液中抗菌肽的方法。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案來完成的，一種快速富集水產(chǎn)蛋白水解液中抗菌肽的方法，所述的水產(chǎn)蛋白水解液通過負(fù)電荷型磁性介孔微球定向富集并濃縮制備水產(chǎn)蛋白水解液中、主要包含精氨酸、組氨酸和賴氨酸殘基的抗菌肽。

作為優(yōu)選：所述的水產(chǎn)蛋白水解液是通過如下步驟制取：

a）原料處理：將水產(chǎn)魚類去頭、去尾、去骨后留取魚肉以作備用；

b）前處理：用清水將步驟a）所得的魚肉洗凈，瀝干水分，切碎后室溫條件下勻漿，冷凍貯藏；

c）復(fù)合酶水解：將步驟b）所得魚肉漿按2-5倍重量比加入去離子水，調(diào)節(jié)pH為6-7，加入復(fù)合酶，溫度40-50℃水解，復(fù)合酶的重量百分比為魚肉漿的0.2%-0.8%，水解1.5-6小時，水解結(jié)束后于沸水中保持8-15min滅酶，冷卻后抽濾，再離心過濾，得到水產(chǎn)蛋白水解液，并于4℃條件下儲存，備用；

所述負(fù)電荷型磁性介孔微球的制備是：首先采用溶劑熱方法制備Fe₃O₄磁性微球，然后通過溶膠凝膠法在Fe₃O₄磁性微球表面包覆介孔二氧化硅，得到磁性介孔硅球，最后用化學(xué)反應(yīng)將負(fù)電荷鍵合在磁性介孔硅球表面。

作為優(yōu)選：所述復(fù)合酶由風(fēng)味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶兩種以上組成，風(fēng)味酶的酶活力為40萬U/克，木瓜蛋白酶的酶活力為200萬U/克，中性蛋白酶的酶活力為10萬U/克；所述復(fù)合酶中風(fēng)味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶重量比為1 ：3 ：2；

所述負(fù)電荷型磁性介孔微球的制備方法具體包括如下步驟：

1)Fe3O4 微球的合成和制備采用溶劑熱法合成Fe₃O₄微球：將1-3mmol的FeCl₃·6H₂O溶于20-50ml乙二醇中，得到黃色透明溶液；將1-5mmol無水醋酸鈉加入到上述溶液中，磁力攪拌30min后，將溶液轉(zhuǎn)入50-100ml不銹鋼反應(yīng)釜中，放入烘箱中在180-220℃下晶化8-72h；產(chǎn)物用30ml乙醇洗6次，真空干燥，得到Fe₃O₄微球；