[發明專利]一種快速富集水產蛋白水解液中抗菌肽的方法

在審

• 申請號: 201810432690.6
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108642114A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 宋茹;韋榮編
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/22
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

1.一種快速富集水產蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：所述的水產蛋白水解液通過負電荷型磁性介孔微球定向富集并濃縮制備水產蛋白水解液中、主要包含精氨酸、組氨酸和賴氨酸殘基的抗菌肽。

2.根據權利要求1所述的快速富集水產蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：

所述的水產蛋白水解液是通過如下步驟制取：

a）原料處理：將水產魚類去頭、去尾、去骨后留取魚肉以作備用；

b）前處理：用清水將步驟a）所得的魚肉洗凈，瀝干水分，切碎后室溫條件下勻漿，冷凍貯藏；

c）復合酶水解：將步驟b）所得魚肉漿按2-5倍重量比加入去離子水，調節pH為6-7，加入復合酶，溫度40-50℃水解，復合酶的重量百分比為魚肉漿的0.2%-0.8%，水解1.5-6小時，水解結束后于沸水中保持8-15min滅酶，冷卻后抽濾，再離心過濾，得到水產蛋白水解液，并于4℃條件下儲存，備用；

所述負電荷型磁性介孔微球的制備是：首先采用溶劑熱方法制備Fe₃O₄磁性微球，然后通過溶膠凝膠法在Fe₃O₄磁性微球表面包覆介孔二氧化硅，得到磁性介孔硅球，最后用化學反應將負電荷鍵合在磁性介孔硅球表面。

3.根據權利要求2所述的快速富集水產蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：

所述復合酶由風味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶兩種以上組成，風味酶的酶活力為40萬U/克，木瓜蛋白酶的酶活力為200萬U/克，中性蛋白酶的酶活力為10萬U/克；所述復合酶中風味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶重量比為1 ：3 ：2；

所述負電荷型磁性介孔微球的制備方法具體包括如下步驟：

1)Fe3O4 微球的合成和制備采用溶劑熱法合成Fe₃O₄微球：將1-3mmol的FeCl₃·6H₂O溶于20-50ml乙二醇中，得到黃色透明溶液；將1-5mmol無水醋酸鈉加入到上述溶液中，磁力攪拌30min后，將溶液轉入50-100ml不銹鋼反應釜中，放入烘箱中在180-220℃下晶化8-72h；產物用30ml乙醇洗6次，真空干燥，得到Fe₃O₄微球；

2) 磁性介孔硅球的制備是：將0.1-0.3g干燥后的Fe₃O₄微球超聲分散到50ml，濃度為1-2mol/l的鹽酸溶液中，超聲分散10min后磁性分離，反復操作三次后超聲分散到20-60ml去離子水中，得到水相磁流體溶液；然后將2-5ml磁流體超聲分散到80ml無水乙醇和20ml去離子水中，加入1-3ml氨水，超聲分散10min，使之完全分散，在電動攪拌下，加入0.5-2mlTEOS，室溫下反應6-12h，磁性分離產物，用去離子水和無水乙醇洗滌3-5次；再次將上述產物超聲分散在60-80ml的去離子水與0.3-0.5gCTAB 的混合溶液中，加入1-2ml氨水和60-80ml的乙醇，室溫下反應0.5h后，加入0.5-3ml的TEOS，反應6-12h后磁性分離產物，并用水和無水乙醇洗滌5次后，將洗滌后的磁性介孔硅球用60ml的丙酮在80℃下反復萃取24-48h，除去CTAB后60℃下真空干燥12h，得到磁性介孔硅球。