[發明專利]一種測定羅漢果中的羅漢果甜苷IIA含量的方法

在審

• 申請號: 201810421989.1
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108562669A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 周先麗;梁成欽;陳旭;羅群;徐慶;黃四新
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南寧東智知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45117
• 代理人: 巢雄輝;汪治興

本發明涉及一種測定羅漢果中的羅漢果甜苷IIA含量的方法，能篩選檢測出具有α?葡萄糖苷酶抑制活性的羅漢果甜苷IIA，為研究和開發治療II型糖尿病藥物提供有效途徑；羅漢果甜苷IIA的濃度在3.00mg.L^?1～11.00mg.L^?1內呈良好線性關系，相關系數r大于0.9994，檢出下限（LOD，S/N=3）為0.42mg.kg^?1，定量下限（LOQ，S/N=10）為1.40mg.kg^?1，能滿足羅漢果藥材中羅漢果甜苷IIA含量的檢測要求；本發明測定方法重復性良好，羅漢果甜苷IIA的RSD值為3.22%～3.68%。

技術領域

本發明屬于羅漢果甜苷檢測技術領域，具體涉及一種測定羅漢果中的羅漢果甜苷IIA含量的方法。

背景技術

羅漢果是葫蘆科多年生藤本植物。其葉心形，雌雄異株，夏季開花，秋天結果。中醫以其果實入藥，含有羅漢果甜苷、多種氨基酸和維生素等藥用成分，主治肺熱痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃體炎、急性胃炎、便秘等 。是中國廣西桂林市著名特產。羅漢果甜苷又稱為甜味素，因其甜度高、熱量低而作為甜味劑廣泛使用，常作為肥胖者和糖尿病患者的代用糖。

糖尿病是一種復雜的慢性代謝紊亂性疾病，每年發病率呈逐年上升趨勢。α-葡萄糖苷酶是存在于小腸絨毛膜刷狀緣上的催化淀粉、蔗糖和麥芽糖水解為葡萄糖和果糖的一組酶系，對調節體內碳水化合物的代謝具有重要的作用；α-葡萄糖苷酶抑制劑可以競爭性抑制α-葡萄糖苷酶的活性，阻斷碳水化合物分解成單個葡萄糖，從而減緩淀粉和蔗糖等向葡萄糖的轉化，進而控制餐后血糖的水平。α-葡萄糖苷酶抑制劑作為治療II型糖尿病的有效藥物類型，已越來越受到人們的關注。以α-葡萄糖苷酶為靶點篩選植物中具有調節血糖作用的活性物質，是研究和開發治療II 型糖尿病藥物重要的有效途徑。

目前羅漢果甜苷的功效和開發利用價值還沒有完全挖掘出來，還未見到篩選檢測出具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的羅漢果甜苷的相關報道。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種操作簡單、靈敏度高、可有效識別羅漢果甜苷IIA的一種測定羅漢果中的羅漢果甜苷IIA含量的方法。

為了實現上述目的，本發明提供以下技術方案：一種測定羅漢果中的羅漢果甜苷IIA含量的方法，包括以下步驟：

（1）羅漢果樣品前處理：

1）烘干：將羅漢果樣品洗凈并于55℃～65℃下烘干，得到干燥的羅漢果樣品；

2）粉碎：將干燥的羅漢果樣品粉碎，得到羅漢果粉末；

3）超聲波提取：將羅漢果粉末放入甲醇中超聲波提取羅漢果甜苷IIA，超聲波提取的工藝參數為：液料比為0.015g/ml～0.025g/ml，超聲功率為120W，頻率為35KHZ～45KHZ，時間為35min～45min，得到超聲波提取液；

4）過濾：用0.40μm～0.50μm微孔膜過濾超聲波提取液，得到待測樣品；

（2）制備對照品溶液：將羅漢果甜苷IIA溶于甲醇中制備得到的羅漢果甜苷IIA對照品溶液；

（3）HPLC-MS法測定待測樣品中羅漢果甜苷IIA含量：

1）液相色譜柱工藝參數：進樣量為1μL，柱溫為20℃～30℃，以甲醇和水做流動相，流速為0.8mL.min^-1～1.2mL.min^-1，洗脫模式為二元梯度洗脫，以55%甲醇等度洗脫；