[發明專利]納米硒負載VP1基因siRNA及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201810419279.5
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108841822A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 朱冰;李英華;林正方
• 申請（專利權）人: 廣州市婦女兒童醫療中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61K9/19;A61K47/02;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 蔡國;馬赟齋

本發明公開了一種納米硒負載VP1基因siRNA，所述納米硒負載VP1基因siRNA的粒徑較小，可以避開免疫系統到達最小的毛細血管，延長在血流中的停留時間；且其具有較高的靶標選擇性、較長的半衰期。所述siRNA干擾的基因位點為第157位核苷酸；所述的siRNA序列為：Sense 5’?ggcaucaucaaaugcuagutt?3’，Antisense 5’?acuagcauuugaugaugcctt?3’。本發明還提供了上述納米硒負載VP1基因siRNA的制備方法和應用。

技術領域

本發明涉及納米硒負載VP1基因siRNA，尤其是納米硒負載VP1基因siRNA及其制備方法與應用。

背景技術

手足口病是由腸道病毒引起的常見傳染病，以嬰幼兒發病為主，以發熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。大多數患者癥狀輕微，但是少數患者可并發心肌炎、肺水腫、急性弛緩性麻痹、無菌性腦膜炎、腦炎等致命性并發癥，個別重癥患兒病情進展迅速，易引起死亡。手足口病自2008年在中國首次大規模爆發以來，每年均有不同程度的流行，常導致各地幼兒園被迫停課停園，給社會和經濟帶來巨大的負面影響。腸道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原。近十年來手足口病的發病率和死亡率一直居高不下的主要因素是EV71病毒有多種基因型，流行中不斷變化，某些位點的基因突變會引起病毒致病性的改變，使手足口病的防治面臨著巨大的壓力。目前還沒有有效的藥物治療，臨床主要是對癥和支持治療，因此，防治手足口病的疫苗及有效的藥物是亟待解決的問題。

EV71病毒滅活疫苗在2015年取得臨床批件，但是近年來EV71病毒的發病率并沒有下降，主要原因有：疫苗株采用的是C4亞型EV71病毒株，臨床流行株可能存在變異的特點造成疫苗的預防效果不佳；另外，疫苗免疫后第6個月中和抗體效價開始下降，保護期限有限。目前針對手足口病尚無有效藥物，臨床上仍以對癥及支持治療為主，因此，有效抗手足口病病原的藥物研究，尤其是廣譜抗手足口病病原的藥物研究有重要的意義。

RNA干擾技術可以針對病毒基因組保守區域發揮作用，從而在一定程度上限制了病毒產生逃避突變株的能力。RNA干擾技術所具有的對靶基因沉默作用的特異性、高效性、穩定性以及不改變宿主基因組等特性，為RNA干擾技術在抗病毒治療中的應用提供了可能，并決定了其用于治療疾病時可以出現藥效強、不良反應小的特性。但siRNA是親水的帶負電的大分子，限制了其被組織細胞攝取，且在生物體內極不穩定，易被RNA酶降解。而且常用的siRNA轉運載體如腺病毒易引發細胞突變及免疫反應，陽離子脂質體對原代細胞、免疫細胞等轉染效率低下。因此，尋找一種合適的載體，將siRNA安全、高效、穩定運載到胞內是siRNA藥物走向臨床應用的關鍵問題。納米顆粒擁有小尺寸效應、表面效應和宏觀量子隧道效應等優良特性，由于其特殊的物理化學性質，作為藥物的轉運載體時，可將藥物包裹在內部，減少藥物進入體內后發生降解、水解及氧化還原反應，增強藥物的穩定性。

硒是人體必需微量元素，在生物體內主要以硒蛋白的形式發揮生物功能和參與各種生理環節。硒和硒蛋白參與病毒性疾病發生發展的作用機制也是人們當前感興趣的研究熱點。研究表明硒參與許多病毒感染的發生、毒力以及病毒性疾病的發生和發展過程；宿主細胞內的硒含量會影響許多入侵病毒的突變、復制和毒力。硒的缺失會引起一些RNA病毒基因組突變的積累，如柯薩奇病毒B3、AIDS、甲型流感病毒、非典型性肺炎冠狀病毒和埃博拉病毒，導致與病毒毒力相關的基因結構發生變化。

目前納米硒運載siRNA的抗病毒研究尚未見報道。

發明內容

本發明的目的之一是提供上述納米硒負載VP1基因siRNA，所述納米硒負載VP1基因siRNA的粒徑較小，可以避開免疫系統到達最小的毛細血管，延長在血流中的停留時間；且其具有較高的靶標選擇性、較長的半衰期。

本發明的目的之二是提供上述納米硒負載VP1基因siRNA的制備方法。

本發明的目的之三是提供上述納米硒負載VP1基因siRNA的應用。