[發明專利]犬副流感病毒單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201810401168.1
• 申請日: 2018-04-28
• 公開（公告）號: CN110412267B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 田克恭;郝麗影
• 申請（專利權）人: 洛陽普泰生物技術有限公司;北京中科基因技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發明涉及犬副流感病毒的鼠單克隆抗體2B7和4H1，該單克隆抗體的可變區序列能特異性、保守性地結合犬副流感病毒。其作為抗體對制備的膠體金檢測試劑盒能高靈敏度的檢測多種犬副流感病毒流行株和標準株，與RT?PCR檢測方法符合率高，能滿足現階段臨床上的迫切需求。

技術領域

本發明涉及犬副流感病毒單克隆抗體，以及含單克隆抗體的抗原檢測試劑盒和應用，屬于生物技術領域。

背景技術

犬副流感病毒(Canine?parainfluenza?virus，CPIV)屬于副黏病毒科、腮腺炎病毒屬病毒，感染動物后多以咳嗽甚至伴隨發熱為主要癥狀，可引發咽炎、扁桃體炎和支氣管炎等病癥。該病毒可感染犬、狐貍、水貂、牛、家兔、猴、羊、馬、禽類、豚鼠、小鼠、倉鼠、貉、虎等多種動物(劉騰飛，犬副流感病毒的檢測和NP基因的克隆、表達及其重組蛋白的免疫學活性的研究,新疆農業大學,碩士學位論文，2010)，以犬、狐貍、水貂的陽性率較高；其中犬是其自然宿主，可感染各個品種及各個年齡段的犬類，特別是幼犬(最易感、病情嚴重且死亡率高)。此外，CPIV感染后可降低犬的免疫力，引起其它病原如犬瘟熱病毒、犬腺病毒2型或細菌如支氣管炎博德特菌、霉形體等病原混合感染或繼發感染，其中臨床上以其與犬瘟熱病毒感染引發呼吸道感染，或與支氣管炎博德特菌為主引起的傳染性呼吸系統疾病(俗稱犬窩咳)最為常見(Nicola?Decaro，Molecular?surveillance?of?traditional?andemerging?pathogens?associated?with?canine?infectious?respiratory?disease)。

犬傳染性呼吸道疾病是犬類的常見疾病，至少有9種病原微生物可以在犬傳染性呼吸道疾病發生過程中起著重要作用，分別是犬流感病毒、犬瘟熱病毒、犬呼吸道冠狀病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、犬皰疹病毒、支氣管敗血波氏菌、馬鏈球菌獸疫亞種、支原體。這些病原感染后臨床表現非常相似，難以區別。目前，確診CPIV病原學的檢測方法包括病毒分離、電鏡觀察、免疫熒光試驗、RT-PCR或熒光定量PCR。其中，病毒分離、電鏡觀察、免疫熒光試驗操作繁瑣，靈敏度低；RT-PCR、熒光定量PCR，靈敏度高，但耗時長，對設備及人員技能要求均較高，僅適用于實驗室檢測，不適用于現場快速準確檢測。而對于臨床的檢測及推廣，膠體金檢測試紙條具有檢測快速、操作簡便的優點，適用性更強。但是，目前CPIV膠體金檢測試紙條的生產廠家較少，主要有上海快靈生物的膠體金檢測卡以及Venture的犬副流感病毒膠體金檢測試紙條，但其敏感性較低，易漏檢，從而導致不必要的經濟損失，而且這些商用試劑盒均不能在犬以外的宿主身上檢測。

同時，現階段的犬副流感病毒發生了一定程度的變異(參見文獻Jae-Ku?Oem等.Molecular?characteristics?of?canine?parainfluenza?viruses?type?5(CPIV-5)isolated?in?Korea.Canadian?Journal?of?Veterinary?Research,Volume?79,Number?1,January?2015,pp.64-67(4)；以及孫明等，犬副流感病毒的分離鑒定及部分基因序列，中國比較醫學雜志，2016.02,26(2):77-82)，其抗原的變化為有效檢測和準確確定動物的感染帶來了更大的難度。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明提供了兩種犬副流感病毒單克隆抗體，特別地，均為針對犬副流感病毒核衣殼蛋白的單克隆抗體，其能特異性、保守性地結合犬副流感病毒。

本發明涉及一種特異性結合犬副流感病毒的鼠單克隆抗體2B7的可變區序列，其中，1)重鏈可變區氨基酸序列為SEQ?ID?No.1編碼的氨基酸序列或該序列經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；2)輕鏈可變區氨基酸序列為SEQ?ID?No.2編碼的氨基酸序列或該序列經過一個或多個氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。