[發(fā)明專利]頭頸部鱗癌標志物引物組合、檢測試劑盒及其定量檢測方法

在審

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• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號: CN108570500A
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發(fā)明（設計）人: 劉超;張東升;龐法偉;崔言軍;柴利
• 申請（專利權）人: 山東省立醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京華進京聯(lián)知識產(chǎn)權代理有限公司 11606
• 代理人: 王賽

本發(fā)明公開了用于檢測頭頸部鱗癌標志物的引物組合，包括用于miR?10b定量檢測的正向引物、用于miR?31定量檢測的正向引物、用于miR?24定量檢測的正向引物中的至少一種。本發(fā)明還公開了頭頸部鱗癌標志物檢測試劑盒，包括用于定量檢測miR?10b、miR?31、miR?24中的至少一種的定量檢測試劑。本發(fā)明還公開了一種頭頸部鱗癌標志物的定量檢測方法。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，特別是涉及一種頭頸部鱗癌標志物引物組合、檢測試劑盒及其定量檢測方法。

背景技術

頭頸部鱗癌(Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck，SCCHN)是世界范圍內(nèi)第6大常見腫瘤。頭頸部鱗癌包括喉癌、口腔癌、鼻咽癌、下咽癌等。2010年，美國疾病控制中心的統(tǒng)計結(jié)果表明，全球每年約50萬人患頭頸鱗癌，死亡人數(shù)約為12000人。近年來，雖然包括手術、放化療等各種治療方法均取得了巨大進展，但由于技術水平等諸多可觀因素的限制，很多腫瘤在發(fā)現(xiàn)時已發(fā)展至中晚期，治療手段局限，治療效果及預后較差，生存率一直較低，頭頸部鱗癌的5年生存率并沒有明顯提高，仍在60％左右。而早期腫瘤體積小，較少轉(zhuǎn)移，如適時進行治療可有效的控制腫瘤發(fā)展，治愈率可達83％，因此積極開展腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、診斷和早期治療的研究，對于癌癥的預防和控制有著重要的意義。

在臨床上，外周血及其他體液的檢測具有創(chuàng)傷小、可重復、可于同一時間點進行檢測多項指標等優(yōu)點，是疾病早期診斷的理想手段。在肺癌、肝癌等癌癥的早期預防和診斷應用中，外周血腫瘤標志物的檢測已成為重要的臨床依據(jù)，如甲胎蛋白、癌抗原125、人癌胚抗原等。與口腔鱗狀細胞癌(OSCC)相關的血清及唾液腫瘤標志物如Cyfra21-1、TPS、CEA、SCC、CA125和CA19-9也有許多研究，然而其在頭頸部鱗癌癥診斷中，由于缺乏靈敏性及特異性，并沒有得到廣泛應用。

因此，尋找可以作為頭頸部鱗癌診斷的腫瘤標志物及其檢測方法，可以開拓頭頸部鱗癌早期診斷的新方法，具有迫切的臨床需求和廣闊的應用前景。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種簡便使用的頭頸部鱗癌標志物引物組合、檢測試劑盒及其定量檢測方法。

一種用于檢測頭頸部鱗癌標志物的引物組合，包括用于miR-10b定量檢測的正向引物、用于miR-31定量檢測的正向引物、用于miR-24定量檢測的正向引物中的至少一種。

在其中一個實施例中，所述引物組合包括用于miR-10b定量檢測的正向引物、所述用于miR-31定量檢測的正向引物、所述用于miR-24定量檢測的正向引物中的兩種或三種的組合。

在其中一個實施例中，所述用于miR-10b定量檢測的正向引物的序列如SEQ IDNO.1所示。

在其中一個實施例中，所述用于miR-31定量檢測的正向引物的序列如SEQ IDNO.2所示。

在其中一個實施例中，所述用于miR-24定量檢測的正向引物的序列如SEQ IDNO.3所示。

一種頭頸部鱗癌標志物檢測試劑盒，包括用于定量檢測miR-10b、miR-31、miR-24中的至少一種的定量檢測試劑。

在其中一個實施例中，所述定量檢測試劑包括所述的用于檢測頭頸部鱗癌標志物的引物組合。

在其中一個實施例中，所述定量檢測試劑還包括反向引物，所述反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

在其中一個實施例中，所述定量檢測試劑還包括PCR反應試劑，所述PCR反應試劑包括逆轉(zhuǎn)錄PCR反應試劑和實時定量PCR反應試劑。

一種頭頸部鱗癌標志物的定量檢測方法，包括以下步驟：

取預定量的待檢測樣品，提取總RNA；