[發明專利]一種利用定量核磁測定多肽中三氟乙酸殘留的方法

有效

• 申請號: 201810391410.1
• 申請日: 2018-04-26
• 公開（公告）號: CN108593696B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 付娜;呂興祥;顧凱;朱子豐
• 申請（專利權）人: 南京明捷生物醫藥檢測有限公司
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 史慧敏

本發明屬于三氟乙酸殘留量檢測技術領域，具體涉及一種利用定量核磁測定多肽中三氟乙酸殘留的方法，采用定量核磁檢測方法，使用環丙沙星作為氟譜內標物，本發明提供一種適用于檢測多肽類藥物中三氟乙酸含量的測定方法，具有樣品消耗較低，節約測定成本，同時具有較高的檢測精度的優點。

技術領域

本發明屬于三氟乙酸殘留量檢測技術領域，具體涉及一種利用定量核磁測定多肽中三氟乙酸殘留的方法。

背景技術

隨著生物技術與多肽合成技術的日臻成熟，越來越多的多肽藥物被開發并應用于臨床。因適應證廣、安全性高且療效顯著，多肽藥物目前已廣泛應用于腫瘤、肝炎、糖尿病、艾滋病等疾病的預防、診斷和治療，具有廣闊的開發前景。在多肽藥物的制備過程中需要引入三氟乙酸作為溶劑，在制備/生產結束后需要去除三氟乙酸，因為三氟乙酸作為四類溶劑，在臨床使用中具有毒性，所以需要嚴格控制成品中性肽成品中三氟乙酸的含量。目前，針對藥物和環境中三氟乙酸殘留測定，常用的方法有高效液相色譜法、離子色譜法或氣質聯用方法等，這些方法通常具有樣品消耗較多的缺點，并且實驗周期長、樣品易污染難回收，對于制備成本較高的多肽類藥物并不適用。

因此，急需一種適用于檢測多肽類藥物中三氟乙酸含量的測定方法，并且應該具備樣品消耗較低，節約測定成本，檢測精度高的優點。

發明內容

本發明提供了如下的技術方案：

一種利用定量核磁測定多肽中三氟乙酸殘留的方法，采用定量核磁檢測方法，使用環丙沙星作為氟譜內標物。

一種利用定量核磁測定多肽中三氟乙酸殘留的方法，包括如下步驟：

S1：儀器與溶劑的準備：

①儀器：核磁共振儀和topspin3.2在線/離線處理軟件；

②溶劑：三氟乙酸鈉標準品、內標物環丙沙星、氘代二甲基亞砜和多肽樣品；

S2：溶液的配置：

①三氟乙酸鈉母液配制：精密稱取三氟乙酸鈉25.00mg，置10ml容量瓶中，用DMSO-d6定容，搖勻至完全溶解，再精密移取1.0ml置10ml量瓶中，用氘代二甲基亞砜定容，搖勻，即得；

②內標環丙沙星母液配制：精密稱取環丙沙星25.00mg，置10ml量瓶中，用氘代二甲基亞砜定容，搖勻，即得；

③供試品溶液配制：精密稱樣品多肽5.00mg，再精密移取內標環丙沙星母液0.10ml置5mm樣品管中，精密加入0.50ml氘代二甲基亞砜，搖勻待測；

注：①-③中的稱重的誤差為±0.01mg；

S3：設定所述核磁共振儀的測定基礎條件：

采用QNP探頭，設定采樣譜寬、采樣中心頻率、采樣點數為、采樣次數、延遲時間為和脈沖角度；

S4：使用核磁共振儀得到圖譜，用手動方式依次進行相位校正、基線校正和化學位移校正，并根據所選的定量峰及積分范圍進行積分。

優選的，所述內標物環丙沙星的純度為84.20±1％。

優選的，采樣譜寬為237.1714ppm，采樣中心頻率為-100.00ppm，采樣點數為64K，采樣次數為64次，延遲時間為20s，脈沖角度為90°。

本發明的有益效果是：