[發(fā)明專利]一種LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810390167.1
• 申請日: 2018-04-27
• 公開（公告）號(hào): CN108486056A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王依楠;劉靜波;張婷
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/0786
• 分類號(hào): C12N5/0786
• 代理公司: 長春市恒譽(yù)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 22212
• 代理人: 李榮武

1.一種LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：采用LPS體外處理RAW264.7細(xì)胞，LPS濃度為1-1000ng/ml，處理時(shí)間為4-24h。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：所述LPS濃度為100ng/ml，處理時(shí)間為16h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)設(shè)置空白組、對照組和實(shí)驗(yàn)組；在96孔板中空白組加入100μl培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組與對照組加入密度為5.0×10⁴cells/ml的RAW264.7細(xì)胞，每孔90μL；在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育24h后，對照組每孔加入10μl培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組中加入10μl LPS溶液；在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育24h，每孔加20μLMTS孵育2小時(shí)，酶標(biāo)儀振蕩10s，在490nm處測定吸光度值；

(2)設(shè)置細(xì)胞對照組和實(shí)驗(yàn)組，將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)為5×10⁵個(gè)/ml，每孔1.8ml接種于24孔板中，對照組加入200μl細(xì)胞培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分別加入200μl LPS溶液，在37℃，5％CO₂條件下培養(yǎng)24h；收集細(xì)胞上清液，用于測定炎癥細(xì)胞因子的相關(guān)指標(biāo)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：所述實(shí)驗(yàn)組LPS濃度為1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml，1000ng/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：所述LPS與細(xì)胞作用時(shí)間為16h。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：所述收集細(xì)胞上清液時(shí)間為培養(yǎng)后第4h、8h、16h、24h。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的建立方法，其特征在于：所述相關(guān)指標(biāo)包括NO，TNF-α，IL-6和IL-1β。