[發明專利]一種快速篩選煙草疫霉拮抗放線菌菌株的方法

在審

• 申請號: 201810378903.1
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN108753908A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 成玉梅;葉紅朝;李淑君;趙世民;康業斌;李成軍;王惠;苗圃;康蕾;李小杰;石秋環;王海濤;白靜科;陳奇園;董昆樂
• 申請（專利權）人: 河南科技大學;河南省煙草公司洛陽市公司;河南省農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 孫笑飛

一種快速篩選煙草疫霉拮抗放線菌菌株的方法，將放線菌和煙草疫霉接種至裝有PDA培養基的培養皿，通過測量抑菌帶篩選出對煙草疫霉具有拮抗作用的放線菌菌株，所述的培養皿中設置有四個繞其中心分布的長方形條帶區域，活化后的放線菌涂抹在四個長方形條帶區域內，并在接種煙草疫霉之前，將涂抹過放線菌的培養皿放入恒溫箱中培養2—4天，然后再在培養皿中心接種活化后的煙草疫霉，在恒溫箱中培養后測量抑菌帶。接種煙草疫霉之前提前接種放線菌并培養一定時間，有利于放線菌菌株抗生素的形成與釋放，對煙草疫霉拮抗作用的現象就能充分的表現出來，增加了拮抗放線菌篩選的有效性與針對性，節約了重復試驗的成本，提高了工作效率。

技術領域

本發明涉及一種菌種篩選方法，具體地說是一種快速篩選煙草疫霉拮抗放線菌菌株的方法。

背景技術

煙草疫霉〔（Phytophthora parasitica var. nicotianae (Breda de Hean)Tuke〕侵染煙草引起的黑脛病廣泛分布于世界煙草種植區，在我國河南、山東、安徽、云南、貴州、廣東、福建、湖南等煙區普遍發生、危害嚴重。

由于化學藥劑的普遍施用使煙葉和煙田土壤中農藥殘留的增加，導致了病害的抗藥性增強和再猖獗，不僅影響煙草的可持續發展，同時危及人類健康，破壞生態平衡。因此，大力推廣生物防治對于煙草可持續發展非常必要。生防微生物指的是那些可以用于防治植物病害的有益微生物。目前，隨著研究的不斷深入，生防微生物的應用已成為植物病蟲害綜合治理的重要手段，同時也是保護生態環境，實現農業可持續發展的有力保證。人們通過自然菌株選育開發的微生物農藥已經有了相當廣泛的應用，對農業生產的發展起到了重要作用。

放線菌(Actinomycetes)屬于原核生物，廣泛分布于自然界，種類繁多，代謝功能各異，是一類有廣泛用途的微生物資源。放線菌是抗生素等一系列生物活性物質的重要生產者，目前世界上報道的上萬種抗生素中，70%以上是由放線菌產生的。放線菌是人們研究最早的生防微生物，對多種作物的多種病原菌均有拮抗作用。從Cohn(1872)發現放線菌至今，已有69屬1687種放線菌被先后報道，已有許多成型制劑應用于生產上，如井崗霉素、內療素、768、S-921、農抗120等，利用放線菌進行植物病害生物防治中應用最多的是鏈霉菌(Streptomyces spp. )及其變種，此外小單孢菌屬(Micromonosporasp. )也有較好的防治效果。

放線菌主要通過對病菌的直接抑制作用或通過增強植物抗病作用發揮生防效果。對病菌的直接作用有抗生作用、競爭作用和重寄生作用，這些作用都能夠抑制病菌生長，有些生防菌甚至能夠抑制病菌致病因子的產生，從而降低病菌的致病力；放線菌也能夠激發植物提高抗病性，增加抗菌物質合成，并以此抑制病原菌的生長、繁殖，達到減輕病害的目的。

近年來，應用拮抗放線菌防治煙草病害的研究越來越多，從煙草中分離拮抗放線菌及煙草內生放線菌一直是研究熱點。傳統的對峙培養法篩選適合于生長速率相近的同類菌株與菌株之間的對峙，如真菌與真菌、細菌與細菌、放線菌與放線菌等，不適合于生長速度快的菌株與生長速度較慢的菌株之間的對峙，如放線菌與真菌、放線菌與細菌等。

由于放線菌種類繁多，其生長速度與病原煙草疫霉菌株相比又非常緩慢，常規的對峙培養方法中，生長速率慢的菌株很容易被生長速率快的菌株所掩蓋，無法觀察到對峙現象，這是生物生存空間競爭所決定的。因此，常規對峙培養方法不適宜于拮抗菌株的篩選。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述缺陷，提供一種能夠快速、有效的對從土壤中分離獲得的大量放線菌菌株對煙草疫霉的拮抗作用進行測定的方法。