[發(fā)明專利]一種檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810373215.6
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108611440A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐邦偉;王勇;葛好林
• 申請（專利權(quán)）人: 上海申亞動物保健品阜陽有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 王桂名

1.一種用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，其特征在于：包括PCR反應(yīng)緩沖液A、FMDV引物探針混合液B、酶系C、陰性對照和陽性對照。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，其特征在于：各組分含量如下：PCR反應(yīng)緩沖液A為384μl，F(xiàn)MDV引物探針混合液B為48μl，酶系C96μl，陰性對照400μl，陽性對照400μl。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，其特征在于：所述的PCR反應(yīng)緩沖液A的組分為5×PCR buffer(Mg2+Plus)和dNTPs組成，所述的酶系C的組分為熱啟動DNA聚合酶、Super M-MLV、RRI的混合物，所述的陰性對照采用DEPC-H2O，所述的陽性對照采用口蹄疫目的基因片段的質(zhì)粒菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，其特征在于：所述的FMDV引物探針混合液B是由一對引物和一條特異性熒光探針組成，所述的引物序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述的熒光探針的序列如SEQ ID NO:3所示，所述的引物序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2為：

SEQ ID NO:1：上游引物ACAAACCTGTGATGGCYT

SEQ ID NO:2：下游引物GGAGATCAACTTCTCCTGTA

所述的探針序列為：

SEQ ID NO:3：CTCTCCTTTGCACGCCGTG。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒，其特征在于：所述的引物序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的擴(kuò)增序列和序列SEQ ID NO:3的探針引物濃度均為10uM/ul，擴(kuò)增引物與探針引物配比為2:2:1。

6.一種利用權(quán)利要求1或2所述的用于檢測口蹄疫病毒的Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒檢測口蹄疫的熒光PCR反應(yīng)體系，其特征在于擴(kuò)增體系如下：

擴(kuò)增體系：