[發(fā)明專利]泡沫分離法濃縮人尿中尿激酶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810371575.2
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108265043B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設計）人: 李瑞;關晶;葛順;朱友雙
• 申請（專利權）人: 濟寧醫(yī)學院
• 主分類號: C12N9/72
• 分類號: C12N9/72
• 代理公司: 漢中市銘源專利代理事務所(普通合伙) 61235
• 代理人: 周沛臣

本發(fā)明的技術方案屬于生物分離領域，尤其涉及泡沫分離法濃縮人尿中尿激酶的方法。該工藝包括：第一步，合格尿液的檢測；第二步，合格尿液的預處理；第三步，兩級泡沫分離工藝。該工藝通過加入尿激酶活性穩(wěn)定劑有效抑制了泡沫分離過程中氣?液界面誘導的尿激酶失活，大幅提高了尿激酶活性的富集比(尿激酶活性富集比為100.0～233.3)，又能增大回收率(高尿激酶總活性收率為75.0～90.0％)。

技術領域

本發(fā)明的技術方案屬于生物分離領域，尤其涉及泡沫分離法濃縮人尿中尿激酶的方法。

背景技術

尿激酶，是從健康人尿中分離的，或從人腎組織或動物細胞培養(yǎng)中獲得的一種酶蛋白。它可將不具有絲氨酸蛋白酶活性的纖溶酶原激活從而發(fā)揮其溶栓作用，在臨床上可預防和控制心肌梗死和腦血栓等疾病。

尿激酶的主要來源于人尿。目前，從人尿中分離尿激酶的方法主要包括沉淀法和吸附法，其中后者使用最為廣泛。但是，人尿中尿激酶含量很低，造成沉淀法和吸附法的成本較高。泡沫分離技術具有低濃度下效率高、成本低和無污染等優(yōu)點，在分離低濃度蛋白質方面有明顯的優(yōu)勢。

泡沫可以誘導蛋白質變性是降低蛋白質泡沫分離效果的主要原因之一。對此問題，上述及目前研究并未采取任何有效技術以減少泡沫誘導的尿激酶失活。

發(fā)明內容

發(fā)明的目的：為了提供一種效果更好的泡沫分離法濃縮人尿中尿激酶的方法，具體目的見具體實施部分的多個實質技術效果。

為了達到如上目的，本發(fā)明采取如下技術方案：

泡沫分離法濃縮人尿中尿激酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

合格尿液的預處理：

向收集到的合格尿液中加入尿激酶活性穩(wěn)定劑，加入質量為尿液質量的0.2～0.5％，然后調節(jié)尿液pH至8.7；

兩級泡沫分離工藝：

第一級泡沫分離工藝：對預處理尿液進行泡沫分離，用泡沫分離塔間歇分離，溫度為20.0～30.0℃，表觀氣速為1.7～3.4mm/s，液層高度為1.0～1.6m，泡沫層高度為0.6～1.2m，對流出塔頂?shù)呐菽M行收集并消泡，待泡沫不能從塔頂流出時，即可停止鼓氣；從塔頂流出的泡沫經(jīng)過消泡后得到第一級消泡液，其尿激酶活性濃度為50.0～80.0IU/mL，該消泡液直接作為第二級泡沫分離的進料；

第二級泡沫分離工藝：將第一級分離得到的消泡液進行泡沫分離，用泡沫分離塔間歇分離，溫度為35.0～45.0℃，表觀氣速為0.8～2.6mm/s，液層高度為0.8～1.2m，泡沫層高度為0.8～1.4m，對流出塔頂?shù)呐菽M行收集并消泡，待泡沫不能從塔頂流出時，即可停止鼓氣；從塔頂流出的泡沫經(jīng)過消泡方法后得到第二級消泡液，其尿激酶活性濃度為500.0～700.0IU/mL，該消泡液作為親和層析法純化尿激酶的原料；泡沫分離塔內所剩殘液的尿激酶活性濃度為15.0～35.0IU/mL，該殘液稀釋至與合格尿液的尿激酶活性濃度相同，與預處理尿液混合均勻后，作為第一級泡沫分離的進料液。

本發(fā)明進一步技術方案在于，在合格尿液的預處理之前還包含對合格尿液檢測的步驟，該步驟為合格尿液的pH值為5.0～6.5，尿激酶活性濃度為3.0～5.0IU/mL。

本發(fā)明進一步技術方案在于，所述尿激酶活性穩(wěn)定劑是β-環(huán)糊精、α-環(huán)狀糊精、γ-環(huán)狀糊精、羥丙基β環(huán)糊精或鉬酸鈉。

本發(fā)明進一步技術方案在于，所述消泡方法為機械消泡法。