[發明專利]一種從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法

在審

• 申請號: 201810371380.8
• 申請日: 2018-04-24
• 公開（公告）號: CN108358989A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 時銘;胡志浩;王欣彤;田鋒
• 申請（專利權）人: 蘇州華賽生物工程技術有限公司
• 主分類號: C07H19/067
• 分類號: C07H19/067;C07H1/06
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 孫茂義

1.一種從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）胞苷發酵液加熱后經陶瓷膜固液分離、超濾膜超濾連續式預處理得到預處理液；

（2）將預處理液調酸后經過強酸性陽離子交換樹脂吸附，再經氨水溶液洗脫得到洗脫液；

（3）洗脫液經加熱減壓除氨、活性炭脫色、過濾得到脫色液；

（4）脫色液經減壓濃縮、醇沉結晶、過濾、淋洗、真空干燥得到胞苷成品。

2.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述的微生物發酵液為大腸桿菌發酵液。

3.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（1）中胞苷發酵液加熱溫度為70-90℃，加熱時間30-60min。

4.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（1）中陶瓷膜過濾精度為0.05μm-0.8μm；超濾膜過濾精度為800-2000道爾頓。

5. 根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（2）中強酸性陽離子交換樹脂為氫型強酸性陽離子交換樹脂；所述氫型強酸性陽離子交換樹脂為001*7、Amberlite IR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1中的一種或幾種。

6.根據權利要求1或5所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（2）中預處理液調酸至pH2.0-3.0經過強酸性陽離子交換樹脂吸附柱處理，上柱流速為1-5BV/h；洗脫液氨水pH值為11.3-11.8，洗脫流速為0.5-3BV/h。

7.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（3）中加熱減壓除氨的終點為料液pH7.2-7.8；所述活性炭為723、727、767藥用活性炭、303糖用活性炭中的一種或幾種，用量為0.05-0.2%，脫色溫度為40-80℃，脫色時間為30-60min。

8.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述步驟（4）中胞苷醇沉結晶濃度為300-500g/L；結晶條件是：加入料液體積1-3倍的甲醇或者乙醇，于4-15℃、120-250rpm的條件下攪拌6-24h；晶體過濾后用80-90%甲醇或者乙醇按體積比1:1淋洗。

9.根據權利要求8所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述真空干燥溫度為45-60℃。

10.根據權利要求1或4所述的從微生物發酵液中分離純化胞苷的方法，其特征在于：所述超濾膜為中空纖維超濾膜，膜材料為聚醚砜；超濾溫度為30-45℃，超濾壓力為0.7-1.2MPa。