[發明專利]一種新型大鼠骨關節炎模型的制備方法

在審

• 申請號: 201810356123.7
• 申請日: 2018-04-19
• 公開（公告）號: CN108452305A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 王秋根;周峰;鄧國英;張菲;沙一帆
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明公開了一種新型大鼠骨關節炎模型的制備方法，包括如下步驟：(1)制備光熱納米材料Cu₉S₅@SiO₂；(2)SD雄性大鼠，6?8周齡，體重180?240克，1％戊巴比妥腹腔按40mg/Kg劑量腹腔麻醉，關節腔注射100μg/ml混勻的Cu₉S₅@SiO₂液100μL，經大鼠髕下韌帶注大鼠膝關節腔；(3)用980nm，0.72W/cm²近紅外激光照射大鼠膝關節，大鼠膝關節最高溫度超過50℃后，持續10min；(4)于4周后取SD大鼠右側膝關節通過膝關節軟骨HE染色評估損傷情況。該方法操作簡單，可以實現能量損傷定量、精準可控，并且可以在熱成像儀下全程監控升溫情況，實現損傷過程的可視化。

技術領域

本發明涉及用于試驗的動物模型的建立方法，具體地說，是一種新型大鼠骨關節炎模型的制備方法。

背景技術

骨關節炎是一種常見的慢性運動系統疾病，好發于老年人的膝關節，可引起關節疼痛進而導致殘疾。隨著我國老年人口比率的增加，骨關節炎患者人數也逐漸增多。骨關節炎的治療包括保守治療和手術治療，保守治療如服用非甾體抗炎藥(NSAID)可暫時緩解疼痛，手術治療主要有關節鏡下清理術、高位腓骨截骨術以及關節置換術等。考慮到手術風險和費用，有必要對骨關節炎這種疾病進一步研究，并尋找新的治療方法。

骨關節炎的發病機制尚不明確，關節面的磨損被認為是初始原因。目前，骨關節炎的發病機制涉及關節軟骨退變，骨質結構重塑，骨贅形成，關節炎癥。其他因素包括老化，肥胖和遺傳易感性也促成骨關節炎的形成。在目前臨床研究存在一些局限性的情況下，動物模型可以重現關節損傷的發生和發展過程，并為找尋新的治療方法提供依據，由此可見，動物模型在骨關節炎的研究中顯得尤為重要。

目前，骨關節炎動物模型分為原發性和繼發性模型，前者包括自發性模型、基因誘導模型，后者包括手術誘導模型、化學藥物誘導模型、關節制動模型等。原發性模型能較好模擬人類骨關節炎自然發生過程，但模型制作耗時長，成本高。繼發性模型受限于動物個體差異等不可控因素，無法精確量化。理想的骨關節炎動物模型要求模型制作操作流程標準化、重復性好、可控制性強。因此，目前研究中仍迫切需要尋找定量、可控的建模方法。

光熱治療是一種新型微創的治療技術，利用光熱轉換材料可以定量地將激光的光能轉換成熱能，實現局部高溫的作用。該技術目前常用于抗腫瘤治療，將光熱材料注射入瘤體或血液系統，在外部激光的照射下將光能轉化為熱能來殺死癌細胞。光熱材料是實現光熱轉換重要因素，是一類具有紅外光熱轉化性質的粒子，目前的光熱納米材料種類繁多，如貴金屬材料納米金棒、核，硫屬銅基材料如Cu₂-XSe、Cu₂-XS，碳基材料，如氧化石墨、碳納米管等。經典的光熱納米材料Cu₉S₅@SiO₂屬性穩定，安全性好，近紅外光吸收能力強，光熱轉化率高。我們嘗試利用其光熱效應產生的熱損傷作用來建立大鼠膝關節骨關節炎模型，實現能量損傷定量、精準可控，并且可以在熱成像儀下全程監控升溫情況，實驗損傷過程的可視化。

中國專利201410270791X公開一種骨關節炎動物模型的制備方法，所述方法包括如下步驟：將基質金屬蛋白酶-3以生理鹽水配備為濃度為5-10nmol/L，尿激酶型纖溶酶原激活物以生理鹽水配備為2-4nmol/L，然后以3:1或2:1比例配備為混合溶液，以0.5mL/kg注射于實驗動物關節腔內。中國專利201010590155.7公開了一種用于骨關節炎造模的藥物組合物及其制備方法與造模方法，所述藥物組合物由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和pH5.7磷酸緩沖液組成，該專利利用了泊洛沙姆控釋與凝膠的雙重特性，使注入關節的木瓜蛋白酶不具有流動性，隨凝膠態的泊洛沙姆黏貼于軟骨表面，并向軟骨釋放，直接致軟骨損傷，獲得骨關節炎模型。現有技術中，關于本發明大鼠骨關節炎模型的制備方法，目前還未見報道。

發明內容