[發明專利]利用全景細胞多維系統檢測水體鎘離子的方法及其應用

在審

• 申請號: 201810351106.4
• 申請日: 2018-04-18
• 公開（公告）號: CN110389115A
• 公開（公告）日: 2019-10-29
• 發明（設計）人: 楊琳;韓玉潔;王蘇桐
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 天津創智天誠知識產權代理事務所(普通合伙) 12214
• 代理人: 李蕊;田陽

1.一種利用全景細胞多維系統檢測水體鎘離子的方法，其特征在于，按照下述步驟進行：

步驟1，調整Datko培養基的PH至5.6～5.8，于100～105kPa、120～125℃下進行滅菌；所述Datko培養基如下：

步驟2，將Cd²⁺加入到步驟1得到的Datko培養基上，得到含鎘Datko培養基；

步驟3，采集浮萍，將浮萍培養于步驟2得到的含鎘Datko培養基上，培養24小時，得到浮萍植株，其中，培養條件為：溫度18～25℃，光周期16～18小時/天，光強95～97μmol m^-2s^-1；

步驟4，夾取步驟3得到的浮萍植株，用A液清洗后，將所述浮萍植株放入離心管中，加入組織固定液固定所述浮萍植株15～20min；其中，所述組織固定液如下：

乙醇水溶液 85～95g/l

冰醋酸 95～100g/l

去離子水 溶劑，

其中，在所述乙醇水溶液中，乙醇的體積濃度為80～90％；

所述A液如下：

步驟5，在酶解溫度為23～27℃的條件下，用組織酶解液在黑暗條件下酶解步驟4所得的浮萍植株25～30min，每間隔10～15min吹打混勻一次，得到懸浮的浮萍原生質體；所述組織酶解液如下：

步驟6，通過離心對步驟5所得的浮萍原生質體清洗2～5次，每次清洗的過程為：用20～25℃的B液垂直打入浮萍原生質體所在離心管，以使浮萍原生質體懸浮，懸浮后進行離心，離心后移除上層清液；

所述B液如下：

步驟7，對浮萍原生質體清洗后，用B液重懸浮萍原生質體，并用移液槍吹打均勻；吹打均勻后，滴20μl Green AM，在黑暗條件下，于37～40℃染色15～20min；

步驟8，按照步驟6所述清洗的過程清洗步驟7得到的浮萍原生質體2～5次；

步驟9，利用全景細胞多維系統分析檢測，通過熒光對鎘離子進行定位分析，根據熒光強度分析鎘離子含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟1之前，制備Datko培養基母液，通過對所述Datko培養基母液進行稀釋得到所述Datko培養基。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述B液的PH為7～8。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步驟1中，滅菌時間為20～25分鐘。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在所述步驟3中，所述A液的PH為7～8。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，在所述步驟6中，每次清洗3～5min，相對離心加速度或相對離心力為2000～2500×g。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述Datko培養基如下：

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，組織固定液如下：

乙醇水溶液 90g/l

冰醋酸 98g/l

去離子水 溶劑。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，組織酶解液如下：

10.如權利要求1～9中任意一項所述方法在定位、檢測和跟蹤鎘離子中的應用。