[發(fā)明專利]一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810337579.9
• 申請(qǐng)日: 2018-04-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108308031A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁增成;袁應(yīng)菊;陸雅林;黃玉霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽東方金橋農(nóng)林科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法，屬于白及組織培養(yǎng)領(lǐng)域。所提供的一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法按留種、蒴果選擇、蒴果處理、無(wú)菌播種、種子萌發(fā)及從生芽的誘導(dǎo)增殖、生根壯苗、煉苗、出瓶洗苗、消毒步驟進(jìn)行組織培養(yǎng)育苗。本發(fā)明提高了紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)種苗的球莖、葉片大小，葉片基部更加粗壯，提高了白及的種植成活率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于白及組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

白及為蘭科白及屬多年生草本植物，植株高18-60cm；假鱗莖扁球形，上面具荸薺似的環(huán)帶，富粘性；莖粗壯，勁直。白及常野生于丘陵、低山溪邊以及陰蔽草叢或者林下濕地，分布于我國(guó)秦嶺以南省區(qū)以及日本等地；以塊莖入藥，具有補(bǔ)肺止血、消腫生肌等功效，同時(shí)也廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、美容、涂料和印染等行業(yè)。實(shí)際生產(chǎn)中，人工白及栽培長(zhǎng)期處于“就地采收—就地留種—就地再栽培”的原始循環(huán)狀態(tài)，白及品質(zhì)逐年退化；在開(kāi)發(fā)種源培植方面，白及組培苗死亡率高的不足以及無(wú)效苗現(xiàn)象的存在對(duì)利用組培苗緩解白及大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化種植產(chǎn)生了一定制約。紫花三叉白及是一種花色為紫色、外觀形態(tài)為三叉的大白及品種，現(xiàn)有的紫花三叉白及組織培養(yǎng)方法培養(yǎng)出來(lái)的白及瓶苗球莖及葉片較小，后期生長(zhǎng)緩慢，成活率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決上述不足，提供一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種紫花三叉白及種子組織培養(yǎng)方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行：

第一步，留種：選擇生長(zhǎng)健壯的植株，且在直徑1Km內(nèi)無(wú)其它種類(lèi)紫花三叉白芨母株，在花期，自然授粉，蒴果開(kāi)始轉(zhuǎn)黃時(shí)，選擇成熟飽滿的蒴果采收。

第二步，蒴果選擇：選擇成熟飽滿、無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)機(jī)械損傷、無(wú)自然開(kāi)裂的蒴果。

第三步，蒴果處理：先把蒴果兩端進(jìn)行處理，用剪刀把果柄修短至1cm，末端黑色的包裹物輕輕除去，但要保證蒴果完整、不開(kāi)裂；再用生活飲用水小流水清洗表面的灰塵約1小時(shí)，晾干表面的水份，用潔凈紙進(jìn)行包裹；處理后的蒴果用75%酒精浸泡30秒，再用無(wú)菌水清洗2～3遍，再用0.1%濃度的升汞浸泡30min，再用無(wú)菌水清洗4～5遍，后在酒精燈火焰上灼燒1S～2S，備用。

第四步，無(wú)菌播種：在無(wú)菌條件下，用鑷子夾住消毒處理過(guò)的蒴果果柄，用解剖刀切開(kāi)蒴果頂端，將蒴果置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)輕輕的抖動(dòng)，均勻撒播一層種子于MS培養(yǎng)基表面，立即封住瓶口。

第五步，種子萌發(fā)及從生芽的誘導(dǎo)增殖：播種的培養(yǎng)瓶置于溫度為23℃～27℃的潔凈環(huán)境中，在光照時(shí)長(zhǎng)為8小時(shí)/天、光照強(qiáng)度為2000lux～3000lux條件下培養(yǎng)一周后，再在光照時(shí)長(zhǎng)為10小時(shí)/天的條件下，繼續(xù)培養(yǎng)35～45天形成原球莖及從生芽。

第六步，生根壯苗：培養(yǎng)瓶在注入95～115ml專有培養(yǎng)基后進(jìn)行高溫殺菌；殺菌后選擇芽體健康、無(wú)污染、長(zhǎng)出兩片小葉、芽高0.8～1.2cm的叢生芽放置在注有專有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，進(jìn)行生根壯苗；培養(yǎng)環(huán)境的光照強(qiáng)度為2000lux～3000lux，光照時(shí)長(zhǎng)為10小時(shí)/天，培養(yǎng)120天～135天，溫度為23℃～27℃。

第七步，煉苗：種苗在溫度15℃～35℃、光照2000lux～20000lux范圍條件下鍛煉15天～20天后，以種苗葉片、種球變深綠即可出瓶。

第八步，出瓶洗苗：打開(kāi)瓶口，用鑷子將經(jīng)過(guò)煉苗后的種苗輕輕夾出，用流動(dòng)的水下進(jìn)行清洗，洗凈根部附著的培養(yǎng)基。

第九步，消毒：將清洗好的種苗用廣譜性殺菌劑稀釋噴霧或浸泡 5s～10s；種苗處理后置于陰涼地方平攤存放并及時(shí)進(jìn)行移植。

所述的專用培養(yǎng)基配置方法按重量組分：MS培養(yǎng)基為1000份、6BA為0.5～1.5份、NAA為0.5～1.5份、炭粉為0.5份、香蕉為50份混合，再加入NaOH調(diào)節(jié)PH值為5.8。