[發明專利]一種快速高效的PPCs細胞培養方法在審
| 申請號： | 201810333226.1 | 申請日： | 2018-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN108531452A | 公開（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發明（設計）人： | 王曉冰 | 申請（專利權）人： | 上海錦映生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/078 | 分類號： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201207 上海市浦東新區中國*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單個核細胞 培養容器 細胞培養 成纖維細胞 明膠 上清液 細胞 重懸 洗滌 細胞培養箱 培養細胞 人體損傷 培養基 稀釋液 包被 分裝 吸除 增殖 備用 接種 | ||
1.一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：使用明膠稀釋液過夜包被培養容器；
步驟2：分離單個核細胞，然后洗滌、離心和重懸后分裝備用；分離單個核細胞的洗滌和重懸過程，使用成纖維細胞的細胞上清液進行，優選使用成纖維細胞培養3天后的細胞上清液；
步驟3：將所述步驟1處理的培養容器內的多余明膠吸除，并將步驟2中獲得的單個核細胞接種到培養容器中，放置于氧濃度為0.5％-7％的細胞培養箱中培養，從接種時間開始計時，間隔固定時間更換新鮮的細胞培養基，培養一定時間后收集細胞。
2.根據權利要求1所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，培養細胞的細胞培養基中一半體積為基礎培養基，另一半體積為成纖維細胞的細胞上清液。
3.根據權利要求2所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，所述的基礎培養基為添加了5-12％knockout血清替代品、0.5％雙抗、0.007ul/ml b-巰基乙醇、10ng/ml SCF以及100U/ml IL-3的DMEM/F12培養基。
4.根據權利要求2所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，所述的成纖維細胞的細胞上清液為成纖維細胞培養3天后的上清液用0.22μm濾膜過濾后獲得。
5.根據權利要求1所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，所述的培養容器為細胞培養瓶或細胞培養板。
6.根據權利要求1所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，所述步驟2中采集的單個核細胞用0.01M PBS洗滌3次后，在200g轉速下離心10分鐘，然后洗滌、離心和重懸后分裝備用。
7.根據權利要求1所述的一種快速高效的PPCs細胞培養方法，其特征在于，所述的培養容器為T75細胞培養瓶，每個T75細胞培養瓶使用3ml的0.1％的明膠稀釋液包被。
8.根據權利要求1-7任意一項所述方法培養得到的PPCs細胞。
9.根據權利要求8所述的PPCs細胞在制備抗衰老藥物中的應用。
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