[發明專利]一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法在審
| 申請號： | 201810332394.9 | 申請日： | 2018-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN108410857A | 公開（公告）日： | 2018-08-17 |
| 發明（設計）人： | 鄧紫宇;唐慶蘭;陳健波;劉媛;盧翠香;郭東強;李昌榮;任世奇;項東云;周維;伍琪;梁忠云 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區林業科學研究院 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙) 45123 | 代理人： | 盧穎 |
| 地址： | 530002 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 混勻 基因組DNA 白千層 取上清液 離心管 氯仿 無水乙醇 液氮研磨 乙醇清洗 緩沖液 混合液 上清液 異戊醇 預熱的 后移 水浴 預冷 備用 沉淀 冷卻 取出 保存 | ||
1.一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：包括以下步驟：
（1) 用液氮研磨互葉白千層新鮮葉樣至粉末狀，迅速移至離心管，加入常規預熱的DNA提取緩沖液，混勻后于65℃水浴30min；
（2) 取出離心管冷卻至室溫，加入與DNA提取緩沖液等體積的氯仿與異戊醇混合液，其混合液體積比為：氯仿:異戊醇=24:1，混勻后于12000 r/min離心10min；
（3）取上清液置于新的離心管，加入與上清液等體積的氯仿，混勻后于12000 r/min離心10min；
（4）取上清液置于新的離心管，加入上清液1.5倍體積的常規預冷的無水乙醇，混勻后于-20℃靜置30min，12000 r/min離心10min，棄上清液；
（5）用體積濃度75%乙醇清洗沉淀2次，室溫下干燥5min，加入DNA溶解緩沖液，置于-20℃保存備用。
2.根據權利要求1所述的一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：步驟（1)所述的DNA提取緩沖液的配方為：2% CTAB、PH為8.0的100mM Tris-HCl、PH為8.0的20mM EDTA、1M NaCl。
3.根據權利要求1所述的一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：步驟（1）所述的新鮮葉樣的重量為1-2g，所述的DNA提取緩沖液加入量為600μl-800μl。
4.根據權利要求1所述的一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：步驟（5）所述的DNA溶解緩沖液的配方為：PH為8.0的10mM Tris-HCl、PH為8.0的1mM EDTA、20-30μg/ml RNA酶。
5.根據權利要求3所述的一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：步驟（1）所述的新鮮葉樣的重量為1g，所述的DNA提取緩沖液加入量為600μl。
6.根據權利要求4所述的一種有效提取互葉白千層基因組DNA的方法，其特征在于：步驟（5）所述的DNA溶解緩沖液的配方為：PH為8.0的10mM Tris-HCl、PH為8.0的1mM EDTA、20μg/ml RNA酶。
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