[發明專利]一種將TLR9應用于治療冠狀動脈粥樣硬化的研究方法

在審

• 申請號: 201810324827.6
• 申請日: 2018-04-12
• 公開（公告）號: CN108546750A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 吳曼;朱曉雷
• 申請（專利權）人: 邦世（蘇州）生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/02;G01N33/533;G01N33/68
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• 代理人: 暫無信息

一種將TLR9應用于治療冠狀動脈粥樣硬化的研究方法，本發明涉及醫療技術領域；研究對象及分組；血標本采集；指標檢測：心臟超聲；冠心病患者術前、術后、無冠心病者一次心肌酶、CRP、BNP檢測；冠心病患者術前術后、無冠心病者一次TLR9檢測；統計學分析。通過用RT?PCR檢測冠心病患者和健康者外周血單核細胞中TLR9 mRNA的表達水平，明確TLR9與冠心病及其預后有無關系并進一步分析是怎樣的關系，經皮冠脈介入治療對TLR9表達的影響，為冠心病治療確立新的靶點。

技術領域

本發明涉及醫療技術領域，具體涉及一種將TLR9應用于治療冠狀動脈粥樣硬化的研究方法。

背景技術

動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病最基本的病理改變，以管壁內脂質積累、免疫細胞(巨噬細胞、T細胞和肥大細胞等)浸潤為特征，早期病變主要表現為內皮下的脂質和巨噬細胞形成的泡沫細胞組成的脂紋的形成，隨著時間的進展逐漸形成一個由纖維帽覆蓋的壞死中心(由凋亡細胞、壞死細胞、細胞碎片以及膽固醇結晶等組成)，且斑塊逐漸增大導致管腔狹窄可引起心肌缺血甚至心肌梗死。巨噬細胞作為AS斑塊中最為典型的炎癥細胞，在AS的發生發展過程中具有重要的作用。在不同局部微環境的影響下，巨噬細胞可活化為不同的亞型，主要表現為兩種：具有促炎作用的經典激活型(M1型)和具有抗炎作用的替代激活型(M2型)，這是巨噬細胞一系列功能亞型中的兩個極端表現。巨噬細胞的極化狀態(M1/M2)則是決定巨噬細胞功能的主要標志，有研究發現冠狀動脈粥樣硬化與心外膜脂肪組織中的巨噬細胞極化狀態密切相關。在機體不斷變化的微環境中巨噬細胞可通過上調其Toll樣受體(toll like receptors，TLRs)的表達而影響其活化表型，有研究表明TLR4可以誘導miR-155的表達，而miR-155可引起M1型巨噬細胞的表達上調及抑制M2型相關因子ArgI的表達。

巨噬細胞(M1/M2)的極化狀態與其在AS斑塊發生發展中的作用密切相關，其中M1型巨噬細胞主要存在于ApoE^-/-小鼠的早期斑塊中，且多見于易損性斑塊；而M2型巨噬細胞主要存在于晚期斑塊中，多與動脈斑塊穩定性增強有關。有研究顯示TLR9的激動劑CpG-ODN可直接或間接激活免疫效應細胞(巨噬細胞和樹突狀細胞等)促進IL-12和TNF-α等Th1類細胞因子的分泌而誘導機體建立Th1型免疫反應，而巨噬細胞被Th1型相關細胞因子或脂多糖激活時可極化為M1型。此時，白介素-1β(IL-1β)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和Ciita表達相對增加；巨噬細胞被Th2型相關細胞因子如IL-4和IL-13等激活時可極化為M2型，進而引起FIZZ1，Arginase-1和Ym1等相關因子的表達上調。目前關于TLR9是否可以影響巨噬細胞的活化表型尚不完全清楚。

近年來多數研究表明免疫反應及伴隨其發生的慢性炎癥反應在AS的發病機制中起到了重要作用。TLRs作為一類經典的模式識別受體，可通過識別病原微生物的相應組分啟動機體的固有免疫反應，并在獲得性免疫反應中也具有重要的作用。TLR9是一種細胞內的重要模式識別受體，主要分布于巨噬細胞、B細胞和樹突狀細胞等免疫細胞，其配體主要是病原體和自身DNA。免疫刺激序列(ISS)是一類人工合成的TLR9特異性激活劑，主要包括三種類型：CpG-ODN-A、B和C型，ODN1826屬于B型CpG-ODN，可有效激活小鼠單核細胞的TLR9。IRS是一類具有免疫調節作用的DNA序列，可有效抑制TLR9的激活。有研究表明ISS可通過激活TLR9而引起Th1/Th2類細胞因子的平衡偏離，而Th1/Th2類細胞因子與巨噬細胞的活化表型密切相關，所以TLR9表達水平的改變可能與巨噬細胞的極化狀態存在相關性。