[發(fā)明專利]一種包蟲病中間宿主病變臟器的快速檢測方法

在審

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• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN108535477A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設計）人: 薛垂召;伍衛(wèi)平;鄭燦軍;韓帥;王瑩;王立英;劉白雪;王旭;蔡輝霞
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所(普通合伙) 43205
• 代理人: 許伯嚴

本發(fā)明提供了一種包蟲病中間宿主病變臟器的快速檢測方法，即通過重組蛋白抗原表達、制備特異性的多抗，制備膠體金試紙條。采用膠體金試紙條，可方便快捷地獲得檢測結果，可用于包蟲病防控工作中牛羊包蟲病患病情況檢查。

技術領域

本發(fā)明涉及疾病預防控制領域，具體涉及一種包蟲病中間宿主病變臟器的快速檢測方法。

背景技術

我國包蟲病流行區(qū)最主要的中間宿主是牛、羊等牲畜，牛羊包蟲病感染率能夠反映當?shù)匕x病流行水平，是衡量當?shù)匕x病流行情況的一項重要參數(shù)，是包蟲病防控工作的一個重要指標。

國內外牛羊包蟲病檢測手段主要包括剖檢觸摸法、PCR鑒定法。目前國內普遍采用現(xiàn)場剖檢觸摸、在實驗室對疑似病灶進行PCR鑒定及兩種方法結合的方法進行牛羊包蟲病檢測。剖檢觸摸法完全依賴相關專業(yè)人員的經(jīng)驗，且誤差較大；PCR方法又需要運至相關實驗室進行鑒定，存在運輸不便等缺點，兩種方法相結合則存在等待檢測結果時間長等缺點。總之，現(xiàn)有的主要方法存在著對技術人員要求高、不便于基層使用、結果不夠準確、反饋結果不及時等缺點。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種包蟲病中間宿主病變臟器的快速檢測方法，即通過重組蛋白抗原表達、制備特異性的多抗，制備膠體金試紙條。采用膠體金試紙條，可方便快捷地獲得檢測結果，可用于包蟲病防控工作中牛羊包蟲病患病情況檢查，可及時地得到檢查結果，解決PCR鑒定法必須運到實驗室進行檢測的問題；根據(jù)抗原抗體反應檢查疑似病灶中的囊液，結果準確，解決現(xiàn)場工作中觸摸法不夠準確和人員經(jīng)驗依賴性的問題；采用膠體金試紙條法，操作簡單，便于基層專業(yè)力量薄弱地區(qū)使用，攜帶方便，解決實驗條件要求高、結果反饋不及時的問題；穩(wěn)定性好，可長期保存。

本發(fā)明的一方面，提供了一種快速檢測包蟲病中間宿主病變臟器的膠體金試紙，其特征在于，通過膠體金顆粒制備、確定抗體最適標記量、金標抗體制備純化、處理液選擇、確定噴涂量、組裝制備而成的。

進一步，所述抗體為利用抗原抗體反應原理制備特異性的抗體。

進一步，所述抗原為從已有的包蟲病病灶中提取囊液，進而提取特異性抗原，根據(jù)其序列進行重組蛋白抗原表達。

本發(fā)明的另一方面，提供了一種包蟲病中間宿主病變臟器的快速檢測方法，其特征在于，通過以下步驟完成：另取適量包蟲病病灶，取適量囊液，滴在膠體金試紙的加樣墊上，現(xiàn)場檢測牛羊內臟，顯示結果。

本發(fā)明的優(yōu)點在于可解決現(xiàn)場觸摸法準確性差、實驗室檢測不及時和要求高的問題。操作簡便，無經(jīng)驗的人稍加示范即可使用，適合現(xiàn)場大規(guī)模應用。對標本既能成批檢測，又可單份檢測，結果顯示快。及時了解牛羊感染情況，為包蟲病防控策略制定和調整提供數(shù)據(jù)資料。試劑穩(wěn)定，可長期儲存；結果準確，不許實驗室檢測；操作簡便，非專業(yè)人員略做示范亦可使用，適合技術力量薄弱的地區(qū)進行現(xiàn)場工作。

具體實施例

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。

實施例1：膠體金試紙條的制備

1、重組蛋白抗原表達。從已有的包蟲病病灶中提取囊液，進而提取特異性抗原，根據(jù)其序列進行重組蛋白抗原表達。

2、制備特異性的多抗。利用抗原抗體反應原理制備特異性的抗體。

3、制備膠體金試紙條。通過膠體金顆粒制備、確定抗體最適標記量、金標抗體制備純化、處理液選擇、確定噴涂量、組裝，制備簡便、快捷的試紙條。

4、檢測。另取適量包蟲病病灶，取適量囊液，滴在加樣墊，現(xiàn)場檢測牛羊內臟；

結果顯示。10min-15min顯示結果，為牛羊內臟檢測及后續(xù)處理提供依據(jù)。

以上所述，僅為本發(fā)明專利較佳的實施例，但本發(fā)明專利的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發(fā)明專利所公開的范圍內，根據(jù)本發(fā)明專利的技術方案及其發(fā)明構思加以等同替換或改變，都屬于本發(fā)明專利的保護范圍。