[發(fā)明專利]一種隱球菌莢膜染色液及其制備和使用方法

有效

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• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN108676838B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發(fā)明（設計）人: 馬爽
• 申請（專利權(quán)）人: 馬爽
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種隱球菌莢膜染色液，其原料包括以下組分：甲醇、磷酸鹽緩沖液、瑞氏染粉、姬姆薩染粉、阿拉伯膠和碳煙，所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合體積比為1/(0.5～2)，所述磷酸鹽緩沖液為PH值6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液；每1000毫升的所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合液中分散所述瑞氏染粉0.1～10克、所述姬姆薩染粉0.03～3克、所述阿拉伯膠2～20克、以及所述碳煙2～20克。本發(fā)明使隱球菌的孢子著色鮮艷，孢子內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，更容易識別；標準的染色方法，試驗成功率高；不需要印度墨汁；染色液性質(zhì)穩(wěn)定，可以長期存放。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種隱球菌檢測技術(shù)領域，特別是一種隱球菌莢膜染色液及其制備和使用方法。

背景技術(shù)

隱球菌是具有肥厚莢膜的真菌，而且其孢子與莢膜、莢膜與外周邊緣清晰，這一特征具有獨特性。因此，在懷疑人類感染新型隱球菌時，觀察隱球菌的莢膜成為首選的、快速的試驗，試驗結(jié)果可以用于疾病診斷，國內(nèi)外不過如此。而觀察莢膜的方法即所謂墨汁染色-“負染法”，是一直未改變的試驗方法。

負染法的特點在于：取隱球菌菌懸液、腦脊液或其他體液，加入印度墨汁(黑色背景)，在顯微鏡下觀察，隱球菌莢膜不著色，染色效果見說明書附圖1。

負染法存在的不足在于：

1.墨汁并不能夠使隱球菌著色，隱球菌孢子、莢膜結(jié)構(gòu)不清晰。

2.試驗方法缺少標準，掌握不好時不能見到莢膜，隱球菌容易漏檢，使人感到操作困難，陽性率低。

3.印度墨汁昂貴。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種隱球菌莢膜染色液，能夠克服現(xiàn)有技術(shù)中負染法存在的不足。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種隱球菌莢膜染色液，包括其原料包括以下組分：甲醇、磷酸鹽緩沖液、瑞氏染粉、姬姆薩染粉、阿拉伯膠和碳煙，所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合體積比為1/(0.5～2)，所述磷酸鹽緩沖液為PH值6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液；每1000毫升的所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合液中分散所述瑞氏染粉0.1～10克、所述姬姆薩染粉0.03～3克、所述阿拉伯膠2～20克、以及所述碳煙2～20克。

本發(fā)明所述的碳煙為墨汁生產(chǎn)行業(yè)常用的原料。

作為上述技術(shù)方案的具體優(yōu)選，所述磷酸鹽緩沖液的配制方法為：在每1000毫升的純凈水中分散無水磷酸二氫鉀6.63克、無水磷酸氫二鈉2.56克。

作為上述技術(shù)方案的具體優(yōu)選，所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合體積比為1/1，每1000毫升的所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合液中分散所述瑞氏染粉1克、所述姬姆薩染粉0.3克、所述阿拉伯膠10克、以及所述碳煙10克。

所述的一種隱球菌莢膜染色液的制備方法，包括以下步驟：首先將所述瑞氏染粉和所述姬姆薩染粉分散在所述甲醇中，然后加入所述磷酸鹽緩沖液進行混合，最后向所述甲醇和所述磷酸鹽緩沖液的混合液中放入所述阿拉伯膠和所述碳煙。

所述的一種隱球菌莢膜染色液的使用方法，包括以下步驟：取待檢測樣品的離心沉淀物與所述隱球菌莢膜染色液按照1/(0.2～5)的體積比混合，置于35℃恒溫箱中染色30分鐘以上，然后取液于載玻片上加蓋玻片，置于顯微鏡下觀察即可。

與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明所提供的一種隱球菌莢膜染色液其具有以下優(yōu)點：

1.隱球菌的孢子著色鮮艷，亮藍色或深棕色，且孢子內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，在染液的襯托下，隱球菌莢膜透亮，更容易識別，使人過目不忘。

2.標準的染色方法，操作簡便，試驗成功率高，可以提高陽性率。