[發明專利]一種黑枸杞不定芽途徑高效誘導多倍體的方法

有效

• 申請號: 201810315863.6
• 申請日: 2018-04-10
• 公開（公告）號: CN108496801B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 陳金煥;饒書培
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京市廣友專利事務所有限責任公司 11237
• 代理人: 張仲波

本發明提供一種黑枸杞不定芽途徑高效誘導多倍體的方法，其是根據秋水仙堿處理濃度和處理時期，直接利用組培無菌苗的幼嫩葉片再生出不定芽進行多倍體誘導，不僅操作方便簡易，最重要的是還可以大大提高誘變效率，降低嵌合體比率，進而大量獲得多倍體材料，以解決現有方法不易高效獲得純合四倍體的問題，對育種研究以及大規模生產均具有重要意義。本發明是直接利用組培無菌苗的幼嫩葉片再生出不定芽進行多倍體誘導，黑果枸杞葉片離體多倍體誘導最佳的處理時期及處理濃度可大大提高誘變效率，降低嵌合體比率，本發明的技術方案中，不定芽的出苗率可達94.1％，四倍體苗獲得率最高可達42.9％。

技術領域

本發明屬于細胞工程組織培養技術領域，特別是指一種黑枸杞不定芽途徑高效誘導多倍體的方法。

背景技術

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)屬茄科(Solanaceae)枸杞屬(Lycium)落葉多棘刺灌木，分布于我國青海、甘肅、寧夏、新疆、西藏、陜西、內蒙古等西北干旱地區，中亞、高加索和歐洲等地區亦有分布(袁海靜等，2013)。黑果枸杞抗旱、抗寒、耐鹽堿、根蘗性強，常以群落形式在干旱、鹽堿的荒漠與半荒漠地區分布(甘青梅等，1997)。除了強抗鹽堿干旱性之外，其成熟漿果中富含花色苷等多酚類物質，鮮果含量約386.9mg/100g，干果中花青素的含量最高達到3690mg/100g，是迄今為止發現花青素含量最高的天然野生果實，具有抗氧化、潛在預防和治療心血管系統疾病等作用(Zheng J,2011)。

就目前市面上流傳的黑果枸杞的果型較小，干果產量低，無法滿足市場需求，浪費大量勞動力，且黑果枸杞大部分為正在逐漸消失的野生資源。眾所周知，多倍體植株的特性多表現為：巨大性、果實無籽莖稈粗壯無刺、營養成分及生化成分含量增多，針對黑果枸杞現存的不完美狀態及其開發價值，多倍體研究是打造提升黑果枸杞營養價值及含量比較適宜的途徑，同時對大規模生產和工業化生產也具有重要意義。

黑果枸杞干果中花青素的含量最高達到3690mg/100g，是迄今為止發現花青素含量最高的天然野生果實，許多關于黑果枸杞的研究均針對于它的保健養生功能，使得黑果枸杞需求量大大增加，且對提升黑果枸杞中花青素含量的研究較少，目前已無法滿足市場的需求。營養成分及生化成分含量增多是多倍體植株的其中一種普遍特性，針對黑果枸杞現存的開發價值，也證實了多倍體研究是提升黑果枸杞營養價值及含量的適宜途徑。目前對于黑果枸杞葉片離體多倍體誘導最佳處理時期的相關研究還未見報道，已有多倍體研究多用種子獲得，無法同時保留同基因型的二倍體對照，而葉片愈傷獲得法嵌合體較高，無法高效獲得純四倍體材料。

參考文獻：

1.袁海靜，安巍，李立會，等.中國枸杞種質資源主要形態學性狀調查與聚類分析[J].植物遺傳資源學報，2013(4):627-633.

2.Zheng J,Ding C X,Wang L S,Li G L.Shi J Y,Li H,Wang H L,Suo YR.Anthocyanins composition and antioxidant activity of wild Lycium ruthenicumMurr.from Qinghai-Tibet Plateau.Food Chemistry,2011,126(3):859-865.

3.甘青梅，駱桂法，普衍，等.藏藥黑果枸杞開發利用的研究[J].青?？萍?，1997(1):17-19。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種黑枸杞不定芽途徑高效誘導多倍體的方法，以解決現有方法不易獲得純合四倍體及獲得四倍體誘導率低的問題。

為解決上述技術問題，本發明通過以下技術方案予以實現：

一種黑枸杞不定芽途徑高效誘導多倍體的方法，包括如下步驟：