[發明專利]一種結球甘藍與甘藍型油菜的遠緣雜交方法

在審

• 申請號: 201810301537.X
• 申請日: 2018-04-04
• 公開（公告）號: CN108450322A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 許忠民;王杏利;張恩慧;姜嬌;李升娟;郭佳;馬青山;石汶汶;吳曉鳳;董藝
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種結球甘藍與甘藍型油菜的遠緣雜交方法，屬于生物技術育種領域，本發明方法包括1)選擇結球甘藍胞質雄性不育系栽培種為母本，以甘藍型油菜恢復系栽培種為父本，人工授粉后進行隔離；2)剪取授粉后15～18d的子房消毒；3)剝離消毒子房的胚珠，誘導培養至胚珠萌發；4)將萌發的胚珠分化培養，得F₁代幼苗；5)分離F₁代幼苗的側芽，接種于生根培養基上，得完整雜交苗。本發明利用胚挽救技術克服了結球甘藍與甘藍型油菜栽培種遠緣雜交時容易發生幼胚敗育而無法獲得雜種植株的問題，將油菜的優良恢復基因轉入結球甘藍胞質雄性不育栽培種中，恢復甘藍的育性，為甘藍的種質資源的創新與應用提供技術依據。

技術領域

本發明屬于生物技術育種領域，具體涉及一種結球甘藍與甘藍型油菜的遠緣雜交方法。

背景技術

結球甘藍(Brassica oleracea L.var.capitata L.，2n＝18)簡稱甘藍，屬十字花科蕓薹屬甘藍種，是我國重要的蔬菜作物，在全國各地均有栽培，年栽培面積達到9×10⁵hm²左右。甘藍的雜種優勢比較明顯。Ogura細胞質雄性不育系的材料表現為母體遺傳、花粉敗育和雌蕊正常，容易被恢復系材料的顯性核恢復基因恢復育性，但無法進行正常的自交分離和進一步種質資源的創新。

結球甘藍和甘藍型油菜都是十字花科中的重要栽培作物，該油菜材料又為恢復系材料，結球甘藍和甘藍型油菜遠緣雜交，大大促進兩種作物間的優異基因交流，將油菜的恢復系基因轉到結球甘藍雄性不育系材料上，恢復甘藍的育性，為甘藍的遺傳育種與種質資源的創新奠定了基礎。但兩者由于受精后雜種胚、胚乳和子房之間缺乏協調性，導致幼胚不發育或中途停止發育，是遠緣雜交育種工作的瓶頸。

在十字花科蔬菜育種過程中胚挽救技術雖有一些報道。例如：Diederichsen.采用遠緣雜交結合胚挽救技術獲得了西蘭花與大白菜雜交的F₁代，連續回交之后將A基因組CR基因轉移到C基因組中。Snowdon等將抗黑脛病基因從白芥轉移到了甘藍型油菜；胡大為等以黑芥為母本、諸葛菜為父本的正交組合獲得了1株真雜種；李俊等以白菜和芥藍進行正反雜交，研究結果顯示，白菜×芥藍的平均雜種獲得率(2.32％)；但到目前為止，國內外幾乎沒有利用幼胚挽救離體培養技術實現親緣關系相對較遠的十字花科結球甘藍與甘藍型油菜種間雜交并獲得雜交后代植株的案例，而且培養周期長、技術復雜。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種結球甘藍與甘藍型油菜的遠緣雜交方法，克服甘藍與甘藍型油菜栽培種遠緣雜交時容易發生幼胚敗育而無法獲得雜種植株的問題，將油菜的優良恢復基因轉入結球甘藍胞質雄性不育栽培種中，恢復甘藍的育性。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種結球甘藍與甘藍型油菜的遠緣雜交方法，包括以下步驟：

1)選擇結球甘藍胞質雄性不育系栽培種為母本，以甘藍型油菜恢復系栽培種為父本，人工授粉后進行隔離；

2)剪取步驟1)所述人工授粉后15～18d的子房，消毒后得消毒子房；

3)剝離步驟2)所述消毒子房的胚珠接種于誘導培養基上誘導培養8～12d，得萌發的胚珠；所述誘導培養基以MS為基本培養基，還包括0.1～0.5mg/L的GA、0.1～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖、6～10g/L的瓊脂、0.2～1％的活性炭和最終質量濃度為0.3～1.2％的水解酪蛋白，pH值為5.5～6.5；

4)將步驟3)所述萌發的胚珠接種于分化培養基上分化培養7～14d，得F₁代幼苗；所述分化培養基以MS為基本培養基，還包括0.2～0.8mg/L的6-BA、20～35g/L的蔗糖和6～10g/L的瓊脂，pH值為5.8；