[發明專利]一種唾液酸酶基因敲除小鼠模型的構建方法及其應用在審
| 申請號： | 201810293790.5 | 申請日： | 2018-04-04 |
| 公開（公告）號： | CN108486154A | 公開（公告）日： | 2018-09-04 |
| 發明（設計）人： | 邵敬偉;張冰晨 | 申請（專利權）人： | 福州大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 福州元創專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學俊;饒文君 |
| 地址： | 350108 福建省福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 唾液酸酶基因 惡性轉化 敲除小鼠 構建 敲除 腫瘤 新型抗腫瘤藥物 病理生理過程 生物技術領域 顯微注射技術 小鼠基因組 受精卵 關鍵步驟 過程研究 基因重組 細胞癌變 質粒載體 腫瘤細胞 重要標志 二倍體 唾液酸 靶向 小鼠 研發 研究 應用 體內 成功 | ||
1.一種唾液酸酶基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，基于CRISPR/Cas9技術，選取Px459 vector，設計靶向NPL基因sgRNA，通過酶切連接得到重組Px459質粒，再將重組質粒注射入受精卵中，獲得唾液酸酶基因敲除小鼠。
2.根據權利要求1所述的一種唾液酸酶基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述重組Px459質粒的構建方法為：
1）根據NPL基因CDS區序列，設計靶向NPL基因sgRNA，得到NPL-sgRNA；
2）合成NPL-sgRNA正向及反向寡核苷酸序列，合成時在兩端加上BbsI酶切位點；通過梯度退火形成雙鏈寡核苷酸；
3）將BbsI酶切后的Px459質粒載體回收，通過T4連接酶與雙鏈NPL-gRNA連接形成重組基因敲除載體；轉化感受態菌種單克隆挑取測序得到所需NPL-gRNA/Cas9重組敲除CRISPR載體，即重組Px459質粒。
3.根據權利要求2所述的一種唾液酸酶基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述的NPL-sgRNA序列為：GGTGTCCGCGGCGGAATCCG。
4.根據權利要求2所述的一種唾液酸酶基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，NPL-sgRNA正向及反向寡核苷酸序列為：
正鏈F:CACCGGGTGTCCGCGGCGGAATCCG ；
反鏈R:AAACCCGGATTCCGCCGCGGACACC。
5.如權利要求1所述的方法構建獲得的唾液酸酶基因敲除小鼠。
6.如權利要求1所述的唾液酸酶基因敲除小鼠在制備抗腫瘤藥物中的應用。
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