[發明專利]人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體構建體及核酸分子與應用

有效

• 申請號: 201810275467.5
• 申請日: 2018-03-30
• 公開（公告）號: CN108484777B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 李吉祐
• 申請（專利權）人: 李吉祐
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

本發明提供了人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體構建體及核酸分子與應用，所述構建體具有序列表7所示核苷酸序列，所述核酸包含該構建體，可應用于免疫細胞，對于腫瘤的治療具有重要應用價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是一種人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體構建體及核酸分子與應用。

背景技術

RP215是1987年研制的單克隆抗體，隨后顯示RP215會與大多數的人類癌細胞表達的免疫球蛋白上的與碳水化合物相關的抗原決定簇(CA215)發生反應(這些癌細胞包括來自于卵巢，子宮頸，肺和肝)，然而，在B細胞產生的正常免疫球蛋白中并沒有發現RP215特異性的抗原決定簇。已經有證據顯示，鼠源或人源化形式的RP215會誘導幾乎所有癌細胞的凋亡和補體依賴性細胞毒性。因此針對人類各種各樣的癌癥，RP215作為高度特異性單克隆抗體，具有治療潛力。

授予Lee的美國專利號8974786公開了鼠源化RP215和人源化RP215的核苷酸和氨基酸序列。生物化學和免疫學實驗證明鼠源化和人源化的RP215對癌細胞表面上的CA215(主要是癌性免疫球蛋白)具有高度特異性和親和力。鼠源化和人源化的RP215(包括其scFv片段)會誘導癌細胞的凋亡以及補體依賴性細胞毒性，最終導致癌細胞的細胞毒性死亡。

如Lee在美國專利8974786中所公開的，人源化RP215單克隆抗體在識別癌細胞表面表達的CA215上與碳水化合物相關的抗原決定簇時與鼠源化RP215具有生物等效性。

嵌合抗原受體(CAR)-T細胞療法技術結合了T細胞免疫療法，基因療法和免疫療法。CAR-T細胞療法已被用于癌癥治療。CAR-T技術包括修飾患者的T細胞，修飾后的T細胞表達嵌合抗原受體(CARs)，可以識別腫瘤細胞上的表面抗原。使用CAR-T治療癌癥的嘗試取得了一些成功。通過使用CD19相關的嵌合抗原受體平臺去治療不同類型的血液癌癥就是一些成功的CAR-T細胞療法實例。美國專利8916381公開了一種用CAR-T技術治療白血病的方法。Brentjens等人進行了用CAR-T治療慢性淋巴細胞性白血病的臨床試驗，修飾過的T細胞能夠識別在大多數B細胞惡性腫瘤上表達的CA19。

盡管如此，這些選擇性靶向和殺死癌細胞的構建體和方法仍然有需要改進的地方。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體構建體。

本發明所要解決的另一技術問題在于提供具有上述構建體的核酸分子。

本發明所要解決的另一技術問題在于提供上述核酸分子的應用。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體(CAR)構建體，信號肽(Signalpeptide)-hRP215scFv-CD8-4-1BB-CD3Z-2A-IL7，其核苷酸序列為圖2D所述序列，具有序列表7所示核苷酸序列。

優選的，上述人源化RP215單克隆抗體的嵌合抗原受體(CAR)構建體，其氨基酸為圖2E所述序列，序列表8所示氨基酸序列；

上述嵌合抗原受體構建體轉染到T細胞后，該嵌合抗原受體構建體會表達人源化RP215的scFv(單鏈可變結構域)片段，將此scFV與通過細胞培養進行體外驗證的人源化RP215比較，它們與癌細胞表面上表達的CA215具相似的親和力和特異性。

一種分離的核酸分子，其包含用于在體外或體內、在免疫細胞轉染和表達的人源化RP215單克隆抗體或其抗原結合片段的構建體；這個構建體包含編碼人源化RP215單克隆抗體或其片段的核苷酸序列。

優選的，上述分離的核酸分子，所述人源化RP215單克隆抗體或其片段含有具序列表1所示氨基酸序列的重鏈。