[發明專利]一種異枝江蘺原生質體的制備方法

有效

• 申請號: 201810270100.4
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108660105B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 劉濤;金月梅;劉翠;池姍
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

1.一種異枝江蘺原生質體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）首先，挑選幼嫩且活力旺盛的藻體，清洗干凈后用0.5g/L I₂-KI溶液浸泡10s，后用大量的消毒海水進行沖洗，并放入消毒海水中暫養后，取出藻體，吸水紙將藻體上水分吸干后用解剖刀將藻體切碎，得到材料；

（2）配制消化用酶液；

（3）將步驟（1）中得到的材料加入步驟（2）配制好的消化用酶液中，所述材料與消化用酶液的質量體積比為1g/10mL，放入25-30℃的恒溫搖床上進行黑暗酶解，每30 min鏡檢一次，觀察并拍照，反應2-3h后，得到酶解液；

（4）用篩絹對步驟（3）中得到的酶解液進行過濾，去除未消化的細胞、細胞團和碎片，取上清液進行離心處理，使單細胞原生質體下沉，細胞碎片留在上清液中，棄去上清液，用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水進行沖洗離心2-3次，收集沉淀后用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水懸浮至1 mL，制得異枝江蘺原生質體；

步驟（2）中所述的消化用酶液為：自制纖維素酶與消毒海水的混合液，每10 mL消化用酶液由1.5 mL的自制纖維素酶和8.5 mL的消毒海水組成；

所述的自制纖維素酶的制備方法為：配制50mmol/L醋酸緩沖液并調整pH為4.8-5.0，分別按1g/10mL的量加入纖維素酶，充分溶解，并調整自制纖維素酶的最終濃度為2%，即得自制纖維素酶；

步驟（3）中所述的材料與消化用酶液的質量體積比為1g/10mL，表示每 10 mL制備好的消化用酶液加入1.0 g材料；

步驟（1）中所述的暫養溫度為24℃，光照強度為3000lx，暫養時間為1-2天；

步驟（4）中所使用的篩絹目數為200目，所述的離心的速度為800rpm，離心的時間為10min。