[發明專利]一種PTEN-Long蛋白純化制備方法

在審

• 申請號: 201810264951.8
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108504671A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 李宏;張謝;譚麟;林劍
• 申請（專利權）人: 寧波市醫療中心李惠利醫院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/47;C07K1/14;C07K1/22;C07K1/34;C12N9/16
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 蔡曉紅;柯夏荷

一種PTEN?Long蛋白純化制備方法，包括以下步驟：S100.將PTEN?Long質粒轉入感受態細菌，獲得轉入質粒后的感受態細菌的菌落；S200.挑取若干個所述菌落，對若干個所述菌落中的細菌進行擴增以獲得具有目標細菌濃度的第二菌液，并對所述具有目標細菌濃度的第二菌液中的細菌進行蛋白誘導得到蛋白誘導后的菌體；S300.裂解所述菌體，獲得初級PTEN?Long蛋白液；S400.用鎳柱純化所述初級PTEN?Long蛋白液得到二級PTEN?Long蛋白液；S500.對所述二級PTEN?Long蛋白液進行脫鹽及濃縮以收集所述二級PTEN?Long蛋白液中的PTEN?Long蛋白。采用本發明提供的PTEN?Long蛋白純化制備方法，只需要一次鎳柱純化即可制備出PTEN?Long蛋白，且利用本發明制備的PTEN?Long蛋白純度更高，制備出的PTEN?Long蛋白的表達率在80％以上。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，尤其涉及一種PTEN-Long蛋白純化制備方法。

背景技術

磷酸酶張力蛋白樣同源物(PTEN)基因，又名多種晚期癌突變(MMAC1)基因，是一種經典的腫瘤抑制基因。PTEN-long是PTEN的mRNA 5’-區的翻譯變體，這個變體使原有翻譯基礎上在N端增加了173個氨基酸，是PTEN蛋白選擇性剪接產物，且在進化上高度保守。PTEN-long能夠被分泌，并在血清及血漿中均能找到，具有明顯外分泌的能力。

相比于PTEN蛋白，PTEN-long蛋白在體外實驗中發現，具有進入細胞，抑制腫瘤生長的能力。鑒于PTEN-Long的這個能力，表明PTEN-Long蛋白具備成為藥物抗腫瘤的能力。制備PTEN-Long純化蛋白則具有實際意義。

但是，現有技術中，制備PTEN-Long純化蛋白純度較低，且在蛋白純化過程中需要。

發明內容

本發明針對上述技術問題，提供了一種PTEN-Long蛋白純化制備方法，其只需要過一次鎳柱且制備出來的PTEN-Long蛋白純度高。

本發明用于解決以上技術問題的技術方案為，提供一種PTEN-Long蛋白純化制備方法，包括以下步驟：

S100.將PTEN-Long質粒轉入感受態細菌，獲得轉入質粒后的感受態細菌的菌落；

S200.挑取若干個所述菌落，對若干個所述菌落中的細菌進行擴增以獲得具有目標細菌濃度的第二菌液，并對所述具有目標細菌濃度的第二菌液中的細菌進行蛋白誘導得到蛋白誘導后的菌體；

S300.裂解所述菌體，獲得初級PTEN-Long蛋白液；

S400.用鎳柱純化所述初級PTEN-Long蛋白液得到二級PTEN-Long蛋白液；

S500.對所述二級PTEN-Long蛋白液進行脫鹽及濃縮以收集所述二級PTEN-Long蛋白液中的PTEN-Long蛋白。

可選地，所述步驟S100包括以下步驟：

S110.取出-80℃下保存的感受態細菌放入冰水中解凍，抽取100微升解凍后的感受態細菌注入第一離心管，并將在第一離心管內加入10ng PTEN-Long質粒，混合均勻；

S120.將裝有混勻的100微升感受態細菌和10ng PTEN-Long質粒的所述第一離心管冰浴30分鐘，然后放入42℃水浴中熱休克45秒，取出后再冰浴1分鐘；

S130.向所述第一離心管中加入LB液體培養液1ml，將所述第一離心管放置在搖床內，在37℃，200rpm的條件下，緩慢振蕩培養90分鐘，形成所述轉入質粒后的感受態細菌的第一菌液；

S140.取出100ul的所述第一菌液涂在固體培養基中，并將固體培養基倒扣放置在37℃的培養箱中，繼續培養16小時以形成所述菌落。