[發明專利]一種與辣椒果實朝向緊密關聯的SNP位點及其通用性分子標記、獲取方法和應用

有效

• 申請號: 201810259902.5
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN110305978B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 歐陽波;陳蓉;于會洋;李峰;陳文超;歐立軍;鄒學校
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.分子標記CaUP12在鑒定辣椒果實朝向中的應用，所述的應用方法具體包括如下步驟：

（1）以辣椒基因組DNA為模板，采用分子標記CaUP12進行PCR擴增，所述的分子標記為正向引物CaUP12-F和反向引物CaUP12-R，其正向引物序列為SEQ ID NO.1，反向引物序列為SEQ ID NO.2；

（2）對PCR產物進行PCR-RFLP限制酶MspI酶切，并利用1%的瓊脂糖凝膠對酶切產物進行凝膠電泳；

（3）檢測PCR-RFLP反應酶切產物，如果出現2個特異條帶，且2個條帶大小分別為445bp、222 bp時，可判斷辣椒材料為純合的果實朝上材料；如果只出現1個特異條帶，且條帶大小為667 bp時，可判斷所測試辣椒材料為純合的果實朝下材料；如果同時出現三個條帶，且3個條帶大小分別為667 bp、445 bp和222 bp時，則可判斷所測試辣椒材料為雜合的果實朝下的材料。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的PCR擴增反應體系，按總體積為20 μl計，包括如下各組分：

正向引物 0.4 μl

反向引物 0.4 μl

10×PCR Buffer 2.0 μl

dNTPs 0.4 μl

Taq DNA聚合酶 0.2 μl

DNA模板 1.0 μl

ddH₂O 補足20 μl。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的PCR擴增反應條件為：95.0℃預變性3 min；95.0℃變性30 s，56.0℃復性30 s，72.0℃延伸45s，設置循環，跳至95℃，30s，循環32次；72.0℃延伸5 min，4℃保存。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的酶切體系如下：

PCR反應產物 10 μl

10×Buffer Tango 2 μl

MspI 1 μl

ddH₂O 補足31 μl。