[發(fā)明專利]一種砂殼蟲的分離與培養(yǎng)技術

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810255574.1
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108485981B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 楊軍;王文平;任可欣
• 申請（專利權）人: 中國科學院城市環(huán)境研究所
• 主分類號: C12N1/10
• 分類號: C12N1/10;C12N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種砂殼蟲的分離與培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟：

1)砂殼蟲的野外采集與富集：使用64μm孔徑浮游生物網(wǎng)在水體表層進行拖網(wǎng)10min，確保30次以上,每4-5次拖網(wǎng)收集一份富集樣品，確保樣品在4h內(nèi)運回實驗室；

2)蟲體的分離、純化：將富集的砂殼蟲放入培養(yǎng)皿或凹玻片，使用微吸管或移液槍在倒置顯微鏡或解剖鏡下對活體砂殼蟲進行逐個挑取，放入超純水中浸泡5min、沖洗3次以上；

3)蟲體的饑餓處理：將分離純化的砂殼蟲蟲體放入裝有超純水的培養(yǎng)皿中，室溫條件下饑餓2-3天；

4)單細胞培養(yǎng)：將饑餓處理后的砂殼蟲蟲體轉(zhuǎn)移到預先添加IWS培養(yǎng)基的無菌細胞培養(yǎng)板中，每個培養(yǎng)孔中接入單個蟲體，并使用斜生柵藻喂食，在30℃的恒溫光照培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，光照周期12:12h，光照強度2000Lx，培養(yǎng)7-10天轉(zhuǎn)移一次蟲體；IWS培養(yǎng)基的組成：使用孔徑0.2μm濾膜過濾的原位水，120℃高溫高壓滅菌的沙粒，直徑小于64μm,密度為1×10^5-7ind/L，以斜生柵藻喂食，密度為1×10^7-9ind/L，原位水：沙粒：柵藻體積比為40:2:1。