[發明專利]一種測定植物組織中生長素的方法

在審

• 申請號: 201810246613.1
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108535374A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 胥倩;李彩霞;王群青;高居榮
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種測定植物組織中生長素的方法，涉及生物檢測技術領域。本發明方法包括：激素提取過程和激素檢測過程；所述激素提取過程包括以下步驟：將新鮮植物樣品在液氮中研磨至碎，得到待提取樣品；向所述待提取樣品中加入甲醇、丙醇及醋酸的混合提取液和0.5ppm的D5?IAA標樣后進行超聲處理和離心處理，將得到的上清液置于棕色玻璃瓶中氮吹至干，得到處理物；對所述處理物進行甲醇重懸后再進行膜過濾，得到的濾液為提取物，對所述提取物進行LC?MS檢測。本發明在植物材料中僅采用一種提取液(甲醇、丙醇及醋酸的混合提取液，并設計三者合理體積比)直接萃取生長素(IAA)，不使用萃取小柱材料，操作簡單且成本低。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種測定植物組織中生長素的方法。

背景技術

植物激素是植物體內產生的一系列天然小分子化合物，參與調控植物的株型建成，光合作用及水分營養利用等重要生理過程。植物激素根據它們的結構和生理功能主要分為以下幾類，包括生長素，細胞分裂素，脫落酸，赤霉素，乙烯五大類。生長素是迄今為止研究最多的一組植物激素，這是因為它們是第一個被發現的植物激素，它們被廣泛地應用于植物繁殖草案中。它調節植物細胞分裂、伸長、分化，并呈濃度依賴性的方式。生長素在植物生長和發育的每一個方面都是必不可少的。植物激素在植物體內含量極低，通常在鮮重0.1-50ug/kg的范圍內，且植物體內化合物種類復雜多樣，因此，植物激素的定性和定量分析一直是植物激素研究領域的難點之一。

植物激素檢測方法主要有放射免疫法，酶聯免疫法，氣相色譜法，高效液相色譜法，氣相色譜-質譜聯用法和液相色譜-質譜聯用法等。隨著高靈敏質譜技術的發展，越來越多基于高效液相色譜一質譜聯用技術的方法建立了起來。高效液相色譜一質譜聯用技術可以同時提供目標激素的保留時間以及分子結構信息，具有靈敏度高，適合多組分分析，可靠穩定等優點，可以實現定性和定量分析的同時完成。

植物激素檢測前需要對材料中的激素進行提取。溶劑提取方法是目前植物激素研究中最常用的方法。從植物材料中將待測的目標植物激素充分地提取，主要由兩方面決定:在液氮冷凍的條件下充分的研磨植物樣品；合適的溶劑提取目標物。通過有機溶劑初步提取的植物粗提液中含有大量的干擾物質，這些干擾測定的物質會影響植物激素的準確定性定量分析。因此需要對植物粗提液進行預處理，對待分析的目標植物激素進行純化富集，盡可能地降低或者消除樣品中復雜的背景干擾，從而使樣品適合定性定量分析。植物激素的純化富集方法包括液一液萃取、固相萃取,薄層層析、半制備高效液相色譜純化及近年來發展起來的新技術，例如固相微萃取和膜萃取技術等。其中液一液萃取基質中存在大量的磷脂等干擾物，產生乳化現象；固相萃取可降低樣品基質干擾，提高檢測的靈敏度，但所用到的萃取小柱價格較高；固相微萃取所使用的涂有萃取介質的纖維頭價格昂貴，易折斷，且由于其有限的體積和表面積決定了它有限的富集能力。

發明內容

有鑒于此，本發明實施例提供了一種測定植物組織中生長素的方法，主要利用液相色譜三重四級桿精確測定植物組織中生長素IAA，解決了檢測成本高和操作繁瑣的問題。

為達到上述目的，本發明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發明實施例提供了一種測定植物組織中生長素的方法，包括激素提取過程和激素檢測過程；其特征在于，所述激素提取過程包括以下步驟：

將新鮮植物樣品在液氮中研磨至碎，得到待提取樣品；

向所述待提取樣品中加入甲醇、丙醇及醋酸的混合提取液和0.5ppm的D5-IAA標樣后進行超聲處理和離心處理，將得到的上清液置于棕色玻璃瓶中氮吹至干，得到處理物；

對所述處理物進行甲醇重懸后再進行膜過濾，得到的濾液為提取物，對所述提取物進行LC-MS檢測。

作為優選，所述新鮮植物、所述混合提取液及所述D5-IAA的比例為100mg：1mL：20μL。