[發(fā)明專利]弗林蛋白酶敲減和GM-CSF增強(qiáng)的(FANG)癌癥疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810243419.8
• 申請(qǐng)日: 2010-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN108295087B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·J·內(nèi)姆納蒂絲;N·森澤;P·B·梅普爾斯;D·拉奧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 格蘭達(dá)利斯有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/002
• 分類號(hào): A61K39/002
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種表達(dá)載體在制備用于在有需要的受試者中預(yù)防、治療和/或緩解癌癥癥狀的藥物中的用途，其中所述表達(dá)載體包含bishRNA^{弗林蛋白酶}/GMCSF表達(dá)載體質(zhì)粒，其中所述載體質(zhì)粒包含：

(a)可操作地連接于啟動(dòng)子的第一核酸插入物，其中所述第一插入物編碼粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA；和

(b)可操作地連接于啟動(dòng)子的第二核酸插入物，其中所述第二插入物編碼能夠與編碼弗林蛋白酶的mRNA轉(zhuǎn)錄物區(qū)域雜交的一個(gè)或多個(gè)雙功能短發(fā)夾RNA(bi-shRNA)，由此經(jīng)由RNA干擾抑制弗林蛋白酶的表達(dá)，其中所述bi-shRNA是弗林蛋白酶表達(dá)的剪切依賴性和非剪切依賴性抑制劑，所述bi-shRNA雜交并靶向所述弗林蛋白酶mRNA轉(zhuǎn)錄物的核酸300-318、731-740、1967-1991、2425-2444、2827-2851或2834-2852。

2.權(quán)利要求1的用途，其中由所述bi-shRNA靶向的區(qū)域?yàn)樗龈チ值鞍酌竚RNA轉(zhuǎn)錄物的3’UTR。

3.權(quán)利要求1的用途，其中由所述bi-shRNA靶向的區(qū)域?yàn)樗龈チ值鞍酌竚RNA轉(zhuǎn)錄物的編碼區(qū)。

4.權(quán)利要求1的用途，其中所述弗林蛋白酶mRNA轉(zhuǎn)錄物為NCBI參考序列登錄號(hào)NM_002569。

5.權(quán)利要求1的用途，其中所述第二核酸插入物編碼ggauccugcu guugacagugagcgcggaga aaggagugaa accuuaguga agccacagau guaagguuuc acuccuuucu ccuugccuacugccucggag uccugcuguu gacagugagc gcggagaaag auaugaaacc uuagugaagc cacagauguaagguuucacu ccuuucuccu ugccuacugc cucggaagcu uug(SEQ ID NO:1)的RNA序列。

6.權(quán)利要求1的用途，其中所述啟動(dòng)子是巨細(xì)胞病毒(CMV)哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子。

7.權(quán)利要求6的用途，其中所述表達(dá)載體進(jìn)一步包括CMV IE 5’-UTR增強(qiáng)子序列和CMVIE內(nèi)含子A序列。

8.權(quán)利要求1的用途，其中所述表達(dá)載體進(jìn)一步在所述第一和第二核酸插入物之間包括編碼小核糖核酸病毒2A核糖體跳躍肽的核酸序列。

9.權(quán)利要求1的用途，其中所述GM-CSF cDNA是人GM-CSF cDNA。

10.權(quán)利要求1的用途，其中所述癌癥是乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、膽囊癌、肺癌或黑色素瘤。

11.權(quán)利要求10的用途，其中所述肺癌是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)或鱗狀細(xì)胞癌。

12.一種制備弗林蛋白酶敲減和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞聚落刺激因子(GM-CSF)增強(qiáng)(FANG)的癌癥疫苗組合物的方法，其包括：

(a)將來自具有癌癥的受試者的腫瘤細(xì)胞置于無菌容器中的抗生素溶液中；和

(b)由所述溶液形成細(xì)胞懸液，其中所述細(xì)胞懸液的形成通過酶分解、機(jī)械解聚或兩者實(shí)現(xiàn)；

(c)使用表達(dá)載體轉(zhuǎn)染所述細(xì)胞懸液以生成所述FANG疫苗，其中所述表達(dá)載體包含bishRNA^{弗林蛋白酶}/GMCSF表達(dá)載體質(zhì)粒，其中所述載體質(zhì)粒包含：

(a)可操作地連接于啟動(dòng)子的第一核酸插入物，其中所述第一插入物編碼粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA；和

(b)可操作地連接于啟動(dòng)子的第二核酸插入物，其中所述第二插入物編碼能夠與編碼弗林蛋白酶的mRNA轉(zhuǎn)錄物區(qū)域雜交的一個(gè)或多個(gè)雙功能短發(fā)夾RNA(bi-shRNA)，由此經(jīng)由RNA干擾抑制弗林蛋白酶的表達(dá)，其中所述bi-shRNA是弗林蛋白酶表達(dá)的剪切依賴性和非剪切依賴性抑制劑，所述bi-shRNA雜交并靶向所述弗林蛋白酶mRNA轉(zhuǎn)錄物的核酸300-318、731-740、1967-1991、2425-2444、2827-2851或2834-2852；

(d)收獲該疫苗；

(e)輻照該疫苗；和

(f)冷凍該疫苗。