[發明專利]一種DNA傳感器及其制備方法、一種檢測短鏈DNA的方法

有效

• 申請號: 201810224539.3
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN108613934B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 張小俊;劉翠婷
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

本發明提供了一種DNA傳感器及其制備方法、一種檢測短鏈DNA的方法，將制備的聚吡咯/銀@氯化銀復合材料電極置于發夾DNA HP1的溶液，孵化后，再放入不同濃度的短鏈DNA中進行孵化，再浸泡在含有Zn²⁺的8?17DNAzyme溶液中，即制備成DNA傳感器。將沒食子酸作為電活性物質，通過檢測光電流的響應大小，來定量檢測短鏈DNA的濃度。與現有技術相比，本發明提供的PEC DNA檢測方法不僅檢測限低，檢測范圍廣，而且對目標DNA有很好的選擇性.此外，可以廣泛應用于檢測各種DNA序列，特別是那些短的特定DNA序列，為開展痕量DNA序列檢測開辟了新的途徑，也為各種疾病的早期診斷提供了有效的檢測手段。

技術領域

本發明屬于生物傳感器技術領域，具體設計一種DNA傳感器及其制備方法、一種檢測短鏈DNA的方法，利用聚吡咯/銀@氯化銀納米線復合電極作為電極材料光電檢測慢性髓細胞白血病的短鏈DNA物種。

背景技術

慢性骨髓性白血病(CML)是一種克隆性骨髓增殖性疾病。慢性粒細胞白血病患者在初期并未出現任何明顯的癥狀，慢性病程可持續3-5年，這些現象給CML的診斷帶來了困難。BCR/ABL基因是該疾病的傳統基因，并且幾乎存在于所有CML患者的病例中。

BCR/ABL基因有許多種類型，而b3a2型是最常見的突變類型之一。因此，檢測b3a2型基因會有助于對疾病進行早期診斷和監測，進一步提高檢測微小殘留白血病細胞的能力。

近年來，CML融合基因的臨床診斷和預后監測方法包括染色體分析，Southern雜交，聚合酶鏈式反應(PCR)，熒光原位雜交(FISH)等。但上述這些方法都有一定的局限性。染色體分析是耗時且不敏感的；傳統的Southern雜交檢測具有特異性，但對基因序列低復制性的檢測非常不敏感，檢測方法復雜，周期過長，而且依賴于危險的放射性標記，限制了它的廣泛性應用于臨床。PCR是一種基于酶的DNA擴增技術，通常用于這些應用。雖然PCR非常敏感，但從實際的角度來看，它仍有待改進。它的缺點包括相對較長的測定時間，高的測定成本以及偶爾會導致“假陽性”信號的容易出錯的性質。FISH技術需要復雜的熒光著色系統，其靈敏度仍不高，不能在臨床上廣泛應用。因此，開展和調查CML基因檢測技術是非常重要的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種DNA傳感器及其制備方法。

本發明還提供了一種檢測短鏈DNA的方法，利用制備的聚吡咯/銀@氯化銀納米線復合電極作為傳感器，光電檢測慢性髓細胞白血病的短鏈DNA物種的方法。

本發明具體技術方案如下：

本發明提供的一種DNA傳感器的制備方法為：

1)將聚吡咯/銀@氯化銀納米線復合電極置于發夾DNA HP1的溶液中，孵化，然后取出電極洗滌，干燥；

2)將步驟1)處理后的電極置于不同濃度的目標短鏈DNA溶液中進行孵化，然后取出電極洗滌，干燥；

3)步驟2)處理后的電極置于含Zn²⁺和8-17DNAzyme的溶液中，孵化；然后取出電極洗滌，干燥；即得DNA傳感器。

步驟1)中將聚吡咯/銀@氯化銀納米線復合電極置于50μL 4μM的發夾DNA HP1的溶液中，DNA HP1溶液的配制方法為：將買回來的DNA HP1加pH 7.4的0.1M的PBS緩沖溶液配成100μM的HP1溶液，然后再用同樣的PBS溶液稀釋到4μM的濃度；備用；

步驟1)中所述聚吡咯/銀@氯化銀納米線復合電極采用201410299007.8公開的方法制備得到。

步驟1)中所述發夾DNA HP1序列為：

5′-GTGAAGGGCGACCACAGAGTTCAAAAGCCCTTCACTAT/RA/GGAAGAGA-SH-3′；