[發(fā)明專利]一種水凝膠腫瘤疫苗的制備方法以及由其制備的水凝膠腫瘤疫苗和其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810219258.9
• 申請(qǐng)日: 2018-03-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110269931B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于海軍;李亞平;王亭亭;王當(dāng)歌;張漢武;周蕾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K9/06;A61K45/06;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 北京金信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11225
• 代理人: 劉鋒;鄭丹

本發(fā)明公開(kāi)一種水凝膠腫瘤疫苗的制備方法以及由其制備的水凝膠腫瘤疫苗和其用途。所述制備方法包括：1)腫瘤細(xì)胞預(yù)處理：向作為載體的腫瘤細(xì)胞中加入疏水性藥物，得到預(yù)處理的腫瘤細(xì)胞；2)水凝膠載體的制備：將多肽和無(wú)機(jī)堿溶解于緩沖液中，充分溶解后，30?90℃水浴加熱5?50min，即制備得到水凝膠載體；3)水凝膠腫瘤疫苗的制備：取步驟2)中制得的水凝膠載體，在渦旋的狀態(tài)下，緩慢加入步驟1)中制備的預(yù)處理的腫瘤細(xì)胞，混合均勻，靜置得到水凝膠腫瘤疫苗。該水凝膠腫瘤疫苗將腫瘤細(xì)胞疫苗與疏水性藥物聯(lián)合，可以增強(qiáng)特異性抗原呈遞的同時(shí)抑制免疫逃避機(jī)制，高效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥及腫瘤治療領(lǐng)域，具體涉及基于機(jī)體腫瘤細(xì)胞的個(gè)性化腫瘤疫苗的制備方法以及由該制備方法制備的腫瘤疫苗和其用途。

背景技術(shù)

腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的最大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、化療和放療對(duì)復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移性腫瘤療效有限。近年來(lái)癌癥免疫療法對(duì)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移腫瘤療效顯著，正受到廣泛關(guān)注。其中，腫瘤疫苗在預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的治療中發(fā)揮重要作用，但傳統(tǒng)腫瘤疫苗在不同患者體內(nèi)的療效差異巨大。主要是目前多數(shù)研究的腫瘤疫苗是針對(duì)于腫瘤細(xì)胞或組織的某種單一抗原分子，而越來(lái)越多的研究顯示腫瘤的發(fā)生發(fā)展并不是由于單一基因的突變，而是由多個(gè)靶點(diǎn)的基因或蛋白分子的變異所引起的。隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，腫瘤新抗原為個(gè)性化腫瘤疫苗的設(shè)計(jì)提供了新的思路，然而，腫瘤新抗原的技術(shù)周期長(zhǎng)、成本高昂，不利于晚期、高惡性程度癌癥病人的長(zhǎng)期治療。因此，本領(lǐng)域亟需構(gòu)建一種工藝簡(jiǎn)單的個(gè)性化腫瘤疫苗用于高效預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

腫瘤細(xì)胞包含大量腫瘤抗原，如果將腫瘤患者實(shí)體腫瘤手術(shù)切除，收集同源腫瘤細(xì)胞、改造并高效調(diào)控抗原釋放行為，有望作為個(gè)性化腫瘤疫苗誘導(dǎo)同一病人產(chǎn)生高強(qiáng)度特異免疫應(yīng)答，抑制其癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。但是由于機(jī)體內(nèi)存在大量的免疫負(fù)調(diào)節(jié)因子如程序性死亡受體1/程序式死亡-配體1(PD1/PD-L1)，白細(xì)胞介素10(IL-10)，色氨酸降解酶(IDO-1)等，極大地減弱了腫瘤細(xì)胞的免疫原性，避免了免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別。因此，將癌細(xì)胞疫苗與免疫調(diào)節(jié)劑合用，增強(qiáng)特異性抗原呈遞的同時(shí)抑制免疫逃避機(jī)制，有望為復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移性腫瘤個(gè)性化治療提供新思路。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于機(jī)體腫瘤細(xì)胞的個(gè)性化的水凝膠腫瘤疫苗的制備方法以及由其制備的腫瘤疫苗和其用途。由本發(fā)明的方法制備的腫瘤疫苗能夠有效抑制腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一方面，提供一種水凝膠腫瘤疫苗的制備方法，步驟如下：

(1)腫瘤細(xì)胞預(yù)處理：向作為載體的腫瘤細(xì)胞中加入疏水性藥物，得到預(yù)處理的腫瘤細(xì)胞；

(2)水凝膠載體的制備：將多肽和無(wú)機(jī)堿溶解于緩沖液中，充分溶解后，30-90℃水浴加熱5-50min，即制備得到水凝膠載體，其中，所述多肽為(FMOC)FMOC-KCRGDK，即N端的賴氨酸的兩個(gè)氨基都被FMOC保護(hù)；和

(3)水凝膠腫瘤疫苗的制備：取步驟(2)中制得的水凝膠載體，在渦旋的狀態(tài)下，緩慢加入步驟(1)中制備的預(yù)處理的腫瘤細(xì)胞，直至混合均勻，靜置得到水凝膠腫瘤疫苗。

本方法步驟(1)中，優(yōu)選地，所述腫瘤細(xì)胞可以為各種來(lái)源的實(shí)體腫瘤細(xì)胞株，優(yōu)選為4T1乳腺癌腫瘤細(xì)胞、EMT6乳腺癌腫瘤細(xì)胞、MCF-7乳腺癌腫瘤細(xì)胞、CT26結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞、B16-F10黑色素瘤腫瘤細(xì)胞，或者，也可以是取自腫瘤患者的手術(shù)腫瘤切塊，從中分離原代腫瘤細(xì)胞，在體外進(jìn)行培養(yǎng)得到擴(kuò)增腫瘤細(xì)胞。