[發明專利]一種蘋果MdPHR1基因及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201810214008.6 | 申請日： | 2018-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN108148849B | 公開（公告）日： | 2021-07-16 |
| 發明（設計）人： | 王小非;郝玉金;李睿 | 申請（專利權）人： | 山東農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/10;C12N5/10;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/20;A01H6/74 |
| 代理公司： | 煙臺上禾知識產權代理事務所(普通合伙) 37234 | 代理人： | 劉志毅 |
| 地址： | 271000 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蘋果 mdphr1 基因 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種蘋果MdPHR1基因，其特征在于，所述蘋果MdPHR1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
2.一種利用權利要求1所述蘋果MdPHR1基因編碼出的多肽，其特征在于，所述蘋果MdPHR1基因編碼的多肽的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.一種如權利要求1所述蘋果MdPHR1基因的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取皇家嘎啦蘋果組培葉片中的RNA并對其進行反轉錄得到嘎啦基因組cDNA；
(2)cDNA全長序列的獲得：根據NCBI查到的擬南芥中At PHR1基因保守氨基酸序列并進行同源序列比對獲得蘋果中MdPHR1基因的核苷酸序列，以MdPHR1-F和MdPHR1-R為引物，以反轉錄合成的嘎啦基因組cDNA為模板進行PCR擴增，得到cDNA全長序列；其中，
MdPHR1-F序列如SEQ.ID.NO.3所示，
MdPHR1-R序列如SEQ.ID.NO.4所示；
(3)PCR產物進行凝膠回收、載體連接、大腸桿菌轉化，測序得到蘋果MdPHR1基因。
4.根據權利要求3所述的蘋果MdPHR1基因的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述PCR擴增反應體系為：
5.根據權利要求3所述的蘋果MdPHR1基因的制備方法，其特征在于，步驟(2)中的反應條件：在95℃預變性5min；循環參數為：95℃變性30sec、58℃退火30sec、72℃延伸1min，運行35個循環；再在72℃延伸10min。
6.一種如權利要求1所述的蘋果MdPHR1基因在轉基因制備蘋果王林愈傷組織和擬南芥中的應用，所述應用為，促進磷酸鹽吸收。
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