[發明專利]3D大腦類器官的制備方法有效
| 申請號： | 201810208751.0 | 申請日： | 2018-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN108456659B | 公開（公告）日： | 2020-05-05 |
| 發明（設計）人： | 范靖;王安欣;鄒潭 | 申請（專利權）人： | 浙江霍德生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/079 | 分類號： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市經*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腦 器官 制備 方法 | ||
1.一種3D大腦類器官的制備方法，其特征在于，包括：
將RONA法獲得的神經球經accutase消化為單細胞，計數后接種于圓底超低附的細胞培養板上在培養基A中在圓周搖床上培養，培養至第7天后在培養基B中繼續培養，培養至第25～35天時，用Matrigel包裹神經球后繼續培養至55～65天，用Matrigel第二次包裹神經球后繼續培養；
所述培養基A包括：維甲酸、BDNF、GDNF、抗壞血酸、cAMP、Neurobasal培養基和不含維生素A的B27添加劑；
所述培養基B包括：BDNF、GDNF、抗壞血酸、cAMP、Neurobasal培養基和不含維生素A的B27添加劑。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將RONA法獲得的神經球經accutase消化為單細胞，計數后接種同等數量的1000～50000個細胞至圓底超低附的多孔細胞培養板上在培養基A中在圓周搖床上培養。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，在培養基A中培養的條件為：在37℃，5％CO2細胞培養箱中的低速圓周搖床上搖動培養。
4.根據權利要求1～3任意一項所述的制備方法，其特征在于，所述培養基A包括：1～5μM維甲酸；10～30ng/ml BDNF；10～30ng/ml GDNF；0.1～0.5mM抗壞血酸；5～15μM cAMP；Neurobasal和不含維生素A的B27添加劑；
所述培養基B包括：10～30ng/ml BDNF；10～30ng/ml GDNF；0.1～0.5mM抗壞血酸；5～15μM cAMP；Neurobasal和不含維生素A的B27添加劑。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述培養基A包括：2μM維甲酸；20ng/ml BDNF；20ng/ml GDNF；0.2mM抗壞血酸；10μM cAMP；Neurobasal和不含維生素A的B27添加劑；
所述培養基B包括：20ng/ml BDNF；20ng/ml GDNF；0.2mM抗壞血酸；10μM cAMP；Neurobasal和不含維生素A的B27添加劑。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，還包括：培養至第85～100天第三次包裹神經球后繼續培養。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，培養至第85～100天用Matrigel第三次包裹神經球后繼續培養。
8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，培養至第30天時，包裹神經球后繼續培養至60天，第二次包裹神經球后繼續培養至90天第三次包裹神經球后繼續培養。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于浙江霍德生物工程有限公司，未經浙江霍德生物工程有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810208751.0/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
