[發(fā)明專利]用于檢測空間環(huán)境中的真菌的引物組合、試劑盒及方法

有效

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• 申請日: 2018-03-14
• 公開（公告）號: CN108148834B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設計）人: 張瑩;鄧玉林;辛聰欣;陳相宇
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 楊彥鴻

本發(fā)明涉及用于檢測空間環(huán)境中的真菌的引物組合、試劑盒及方法。本發(fā)明所述引物組合包括引物F3、B3、FIP和BIP，其中，引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。本發(fā)明所述引物組合、試劑盒以及檢測方法能夠同時對空間環(huán)境中常見的多種真菌進行LAMP檢測，具有檢測范圍廣、特異性好、靈敏度高、檢測周期短、不存在二次污染等優(yōu)點，特別適合在空間中進行在軌實時檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學領域，具體而言，涉及用于檢測空間環(huán)境中的真菌的引物組合、試劑盒及方法。

背景技術

雖然對空間設施中的微生物濃度有嚴格的規(guī)定，但在軌空間站例如和平號空間站和國際空間站的調查表明，微生物在這些設施中是普遍存在的。Aspergillus niger、Ulocladium botrytis和Cladosporium herbarum等真菌種屬的孢子廣泛存在于在軌和平號空間站。這些環(huán)境中的微生物對宇航員健康有潛在的影響。特別是，過量存在的真菌可能會導致過敏，霉菌毒素中毒癥，或嚴重的真菌病。與此同時，研究表明造成航天器設備故障的主要微生物也是是真菌。

鑒于此，快速和高度敏感的真菌監(jiān)測技術在評估太空設施和相關環(huán)境的污染方面是必不可少的。

目前，NASA制定的真菌檢測方法是基于培養(yǎng)的方法。這種方法費時費力，且易造成二次生物污染。此外，大多數的氣溶膠病原體是一種活的非可培養(yǎng)狀態(tài)，不能用培養(yǎng)方法檢測。而基于PCR的方法無需培養(yǎng)，因此可以用于替代基于培養(yǎng)的真菌檢測方法。其中，qPCR(quantitative PCR)是一種非常有效的定量監(jiān)測地球上真菌的方法，但將這種技術應用于空間環(huán)境，例如在軌空間站的檢測需要進一步改進簡單性、靈敏度、定量能力和成本效益。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種引物組合，其包括引物F3、B3、FIP和BIP，所述引物組合為與環(huán)介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)配套使用的引物組合，能夠通過LAMP技術、優(yōu)選通過qLAMP技術，對空間環(huán)境中常見的多種真菌同時進行檢測，具有檢測范圍廣、特異性好、靈敏度高、檢測周期短、不存在二次污染等優(yōu)點，特別適合在太空中進行在軌檢測。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種試劑盒，將前述引物組合和輔助檢測試劑集成于同一試劑盒，具有使用方便的優(yōu)點。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種檢測空間環(huán)境中的真菌的方法，所述方法使用前述引物組合或前述試劑盒進行LAMP試驗，能夠對空間環(huán)境中常見的多種真菌同時進行檢測，具有檢測范圍廣、特異性好、靈敏度高、檢測周期短、不存在二次污染等優(yōu)點，特別適合在太空中進行在軌檢測。

為了實現本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種引物組合，包括引物F3、B3、FIP和BIP，其中，引物F3的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

在付出大量創(chuàng)造性勞動后，本發(fā)明獲得前述引物組合。本發(fā)明所述引物組合為特異性針對空間環(huán)境(如在軌空間站)中常見真菌的LAMP引物，其能夠通過LAMP檢測方法對空間環(huán)境中的多種真菌進行廣譜、靈敏而特異的檢測，為在空間環(huán)境下實地快速、準確地檢測真菌提供可能。