[發明專利]一種具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810198415.2
• 申請日: 2018-03-12
• 公開（公告）號: CN108300678B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 李海云;袁治豪;鄭里華;陳慧英;李培駿;李霞
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/01;C02F101/22
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本發明公開了一種具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法及應用，該菌株分類命名為陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)，已于2017年06月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，郵編：100101，保藏編號為CGMCC NO.14265。本發明是從鉻超積累植物李氏禾的根部組織中分離篩選出的李氏禾內生細菌，經鑒定為陰溝腸桿菌，命名為G04。該菌株可將六價鉻還原為三價鉻，并明確了還原六價鉻的條件，為六價鉻污染的微生物修復提供了菌株資源及理論基礎。

技術領域

本發明涉及一種可用于環境污染治理的菌株，特別涉及到一種具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法及應用。

背景技術

隨著現代化技術的發展，重金屬鉻在制藥、電鍍等多領域中得到了廣泛的應用。但與此同時，環境中的鉻及其化合物的污染問題也越來越嚴重。長期接觸鉻及鉻化合物容易對胃腸道系統、免疫系統、肝臟和腎臟產生影響甚至誘發呼吸系統癌癥。各種鉻形態中，主要以鉻酸根和重鉻酸根形式存在的Cr(VI)被認為是毒性最強的。國際上對鉻污染的水體、土壤都提倡采用生物修復法，即借助微生物或植物的絮凝、吸收累積、富集等作用去除重金屬離子。從鉻重金屬污染的環境中分離的白色桿菌屬(Leucobacter sp.)、假單胞菌屬(pseudomonad)、鏈霉菌屬(Streptomyces griseus.)、芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)和棲熱菌屬(Thermusscotoductus)都具有較好的Cr(VI)去除能力。

超富集植物具有生物量大、對重金屬吸附量是常規植物10～500倍、可在重金屬污染土壤中生長良好等優勢，在環境污染修復中的應用日益廣泛。與此同時，超富集植物內生菌的研究也開始受到研究者的重視，如As超富集植物蜈蚣草、Zn超富集植物東南景天、Cd超累積植物龍葵、Mn超積累植物商陸等均有研究報道。李氏禾(Leersia hexandra Swartz)是張學洪等在廣西桂林發現的鉻超積累植物，也是第一種在中國境內被發現的鉻超積累植物，研究表明其對Cr(III)和Cr(VI)都有較強的富集能力。但目前利用李氏禾內生細菌對重金屬Cr(VI)進行還原的研究尚未見報道。本發明以李氏禾為原材料，為六價鉻污染微生物修復提供了新的微生物資源。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法，該菌株具有將六價鉻還原為三價鉻的功能。

本發明所采用的技術方案是一種具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法，具體步驟為：

(1)采集李氏禾植物，選取適量健康無病害李氏禾根，蒸餾水沖洗干凈；

(2)將步驟(1)所得李氏禾的根在無菌條件下用70％的酒精浸泡20s，2.5％次氯酸鈉溶液浸泡1min，然后用無菌水沖洗6次；

(3)挑取步驟(2)所得的適量的根組織，研磨，接種于牛肉膏蛋白胨液體培養基，在37℃，120r/min條件下振蕩培養2d；

(4)將步驟(3)所得物稀釋后涂布于含Cr(Ⅵ)濃度為200mg/L的牛肉膏蛋白胨固體培養基，37℃培養2d，挑取長勢較好的菌落，經反復劃線獲得李氏禾內生細菌；

所述的李氏禾內生細菌，分類命名為陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)，該菌株已于2017年06月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.14265，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

所述的具有還原六價鉻的李氏禾內生細菌的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所使用的植物為桂林理工大學環境科學與工程學院實驗室的鉻超積累植物李氏禾的根部組織。