[發(fā)明專利]一種禽流感病毒樣顆粒疫苗、及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810191751.4
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN110240634B
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;王同燕;張盼濤;孫進(jìn)忠;張?jiān)S科
• 申請（專利權(quán)）人: 普萊柯生物工程股份有限公司;普萊柯（南京）生物技術(shù)有限公司;普萊柯（南京）生物工程有限公司
• 主分類號: C07K14/11
• 分類號: C07K14/11;C12N15/866;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發(fā)明涉及一種禽流感病毒樣顆粒抗原以及其制備方法和使用該抗原制備的疫苗。該禽流感病毒樣顆粒抗原在使用昆蟲細(xì)胞制備時能有效組裝，呈現(xiàn)為病毒樣顆粒粒子。該禽流感病毒樣顆粒抗原制備的疫苗能有效提供針對H5亞型和/或H9亞型禽流感病毒的有效保護(hù)，其保護(hù)效力較相同HA抗原含量的滅活苗相當(dāng)或更優(yōu)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，特別涉及一種提供針對禽流感病毒進(jìn)行保護(hù)的病毒樣顆粒疫苗、及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

病毒樣顆粒(Virus-like particles，VLPs)，是由病毒的結(jié)構(gòu)蛋白組裝而成的介于15nm～400nm的空心顆粒。VLPs的制備可以通過體外高效表達(dá)某種病毒的一種(或幾種)結(jié)構(gòu)蛋白，使其自動裝配成在形態(tài)上類似于天然病毒的空心顆粒。其方法主要是將病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因克隆到表達(dá)載體中，再將這些載體轉(zhuǎn)入原核或真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。

禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)屬于正粘病毒科，流感病毒屬，A型流感病毒。禽流感(Avian Influenza，AI)是由該病毒引起的禽類感染和疾病綜合癥。國際獸醫(yī)局(OIE)和我國《家畜家禽防疫條例》均將該病列為A類烈性傳染病。目前在世界上許多國家和地區(qū)都有該病發(fā)生的報(bào)道，其中尤為以H5亞型毒株引起的高致病性禽流感(HPAI)更為嚴(yán)重，其以突然發(fā)病和高死亡率為主要特征，常常導(dǎo)致飼養(yǎng)雞群的全部死亡。

截止到目前，接種全病毒疫苗仍然是預(yù)防和控制禽流感病毒流行的最有效手段。然而，由于禽流感病毒的變異速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于變異株相應(yīng)疫苗的研發(fā)制備速度，而且不同亞型之間幾乎不產(chǎn)生交叉免疫保護(hù)，因此禽流感疫苗的生產(chǎn)需要時時、不斷更新，而針對流感病毒流行株相應(yīng)疫苗的生產(chǎn)周期較長、生產(chǎn)成本較高，造成人力、物力的浪費(fèi)，還有可能達(dá)不到理想的防控效果。

目前現(xiàn)有技術(shù)中文獻(xiàn)研究發(fā)表的禽流感病毒樣顆粒疫苗雖然能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答，但依然達(dá)不到商品化全病毒疫苗的免疫效果，且普遍表達(dá)效率較低，為此，急需一種免疫效果良好、安全、成本可控的禽流感病毒樣顆粒疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種禽流感病毒樣顆粒抗原，其中，所述禽流感病毒樣顆粒抗原由H5亞型禽流感病毒HA、NA、M1抗原組裝而成。所述禽流感病毒樣顆粒抗原具有良好的免疫原性，能提供對禽流感病毒的完全保護(hù)，其免疫效力與相同HA抗原含量的滅活苗相當(dāng)或更優(yōu)。

本發(fā)明還涉及一種禽流感病毒樣顆粒疫苗，其中，所述禽流感病毒樣顆粒疫苗包括免疫量的所述的禽流感病毒樣顆粒抗原和藥學(xué)上可以接受的載體。

本發(fā)明的禽流感病毒樣顆粒疫苗其免疫效力與相同HA抗原含量的商用滅活苗相當(dāng)或更優(yōu)；且不僅對H5亞型禽流感提供保護(hù)，還能對H9亞型禽流感提供保護(hù)。

本發(fā)明的另一個目的在于提供制備所述的禽流感病毒樣顆粒抗原的方法，其中，所述方法包括：步驟(1)將所述HA、NA、M1抗原蛋白基因克隆到同一載體，所述H5亞型禽流感病毒HA、NA、M1抗原蛋白基因分別由序列SEQ.ID No.1、SEQ.ID No.3、SEQ.ID No.5所示或由序列SEQ.ID No.2、SEQ.ID No.4、SEQ.ID No.6所示；步驟(2)將所述步驟(1)獲得的載體經(jīng)轉(zhuǎn)化重組獲得含有所述HA、NA、M1抗原蛋白基因的重組桿狀病毒質(zhì)粒；步驟(3)將所述步驟(2)獲得的所述含有HA、NA、M1抗原蛋白基因的重組桿狀病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞sf9，串聯(lián)表達(dá)所述HA、NA、M1抗原蛋白；以及步驟(4)分離在昆蟲細(xì)胞內(nèi)自我組裝完成后釋放到細(xì)胞外培養(yǎng)基上清中的由所述HA、NA、M1抗原蛋白組裝而成的禽流感病毒樣顆粒抗原。

本發(fā)明利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)包含禽流感HA、NA、M1的H5亞型禽流感病毒樣顆粒抗原，所述HA、NA、M1抗原能在昆蟲細(xì)胞內(nèi)自我組裝，呈病毒樣顆粒粒子釋放到細(xì)胞外培養(yǎng)基上清中，表達(dá)組裝高效。