[發明專利]一種基于量子點微球的熒光免疫層析檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201810189415.6
• 申請日: 2018-03-08
• 公開（公告）號: CN108398566A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 李婧;徐琳;王銳
• 申請（專利權）人: 江蘇瑞安生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，包括：

檢測殼和裝載于該檢測殼內的試紙條；其中

所述試紙條包括：

底板，該底板的相對兩端分別覆蓋樣品墊和吸水紙以及該底板的中間覆蓋NC膜；

所述樣品墊和吸水紙靠近NC膜的一側均搭接在NC膜兩邊沿上；以及

所述NC膜上設置有互不相交的質控線和檢測線。

2.一種基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡的制備方法，其特征在于，包括：

步驟S1，制備量子點熒光微球標記抗體；

步驟S2，對樣品墊進行預處理；

步驟S3，對樣品墊進行處理；

步驟S4，NC膜的制備；

步驟S5，制備樣品稀釋液；以及

步驟S6，制備試紙條，并將試紙條裝載于一檢測殼內，以得到基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡。

3.根據權利要2所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S1中制備量子點熒光微球標記蛋白液的方法包括：

取量子點熒光微球，用10～100mM、pH 6.0～7.0 MES緩沖液調節濃度為10mM～200mM，混勻后加入終濃度為50mM～200mM的EDC（1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亞胺鹽酸鹽）及終濃度為50mM～200mM的NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）混勻，室溫孵育10～30min后10000～15000rpm離心5～50min，去除上清液分離得到沉淀物，用10～100mM、pH 6.0～7.0 MES緩沖液溶解，將復溶后的量子點熒光微球超聲分散，按照0.3～1mg/mL量子點熒光微球的比例加入AMH單克隆抗體，混勻后室溫反應1～3h，然后加入10%～20%的BSA溶液混勻，室溫反應0.5～1h后，10000～15000rpm離心5～20min，去除上清液分離得到沉淀物用微球復溶液液復溶，2～8℃保存。

4.根據權利要3所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S2中對樣品墊進行預處理的方法包括：

將樣品墊用緩沖液浸泡后，置于濕度＜20%、溫度為30～50℃的烘箱，干燥12～24h后于2～30℃密封保存，所述緩沖液含10mM～100mM的Tris，0.5%～5%的BSA，0.5%～5%的蔗糖，0.05mg/mL～1.5mg/mL的RBC抗體。

5.根據權利要4所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S3中對樣品墊進行處理的方法包括：

將量子點熒光微球標記的AMH單克隆抗體和量子點熒光微球標記的兔抗分別用標記處理液噴涂在樣品墊上，噴量為3～6ul/cm。

6.所述標記處理液中含有0.5%～5%的BSA，5%～25%的蔗糖，10mM～100mM的Tris緩沖液。

7.將制備好的樣品墊置于濕度＜20%、溫度為30～50℃的烘箱，干燥12～24h后于2～30℃密封保存。

8.根據權利要5所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S4中NC膜的制備方法包括：

分別將另一AMH單克隆抗體以及所述羊抗兔抗體用包被液調節濃度為0.5～2mg/mL，將AMH單克隆抗體噴到NC膜的檢測線，將羊抗兔抗體噴到NC膜的質控線，檢測線和質控線間隔3～8mm，置于濕度＜20%、溫度為30～50℃的烘箱，干燥12～72h后于2～30℃密封保存，備用。

9.根據權利要6所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S5中制備樣品稀釋液的方法包括：

所述樣品稀釋液包含0.5%～5%氯化鈉、0.5%～5%表面活性劑、0.5%～5%BSA、0.01%～1%防腐劑的10～100mM、pH7.0～8.0 PBS緩沖液。

10.根據權利要7所述的基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡，其特征在于，

所述步驟S6中制備試紙條，并將試紙條裝載于一檢測殼內，以得到基于量子點微球檢測AMH的熒光免疫層析檢測卡的方法包括：

所述試紙條如權利要求1所述，即

在一PVC底板上相互搭接粘貼樣品墊、NC膜和吸水紙，然后切割成3～4mm寬度的若干試紙條。