[發明專利]一種用于預防HPV感染的核酸疫苗

在審

• 申請號: 201810186917.3
• 申請日: 2018-03-07
• 公開（公告）號: CN108424926A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 龐以芹;謝亦武;吳必杰;魏勇
• 申請（專利權）人: 江蘇潤潔生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.一種HPV-L1重組微環DNA，其特征在于，所述HPV-L1重組微環DNA連接有HPV-L1重組片段，所述HPV-L1重組片段由信號肽序列區和HPV16亞型的L1基因依次連接組成，所述L1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根據權利要求1所述的重組微環DNA，其特征在于，所述信號肽序列區為選自組織型纖溶酶原激活物tPa、HSV gDs及生長激素的分泌信號肽對應的核苷酸序列中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述的重組微環DNA，其特征在于，所述信號肽序列區的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根據權利要求1所述的重組微環DNA，其特征在于，所述HPV-L1重組片段還包含標簽區，所述標簽區與權利要求1所述的L1基因連接并位于其下游。

5.根據權利要求4所述的重組微環DNA，其特征在于，所述標簽區的核苷酸序列如SEQID NO:3所示。

6.根據權利要求1所述的重組微環DNA，其特征在于，所述HPV-L1重組片段末端為終止密碼子。

7.根據權利要求1所述的重組微環DNA，其特征在于，所述HPV-L1重組片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

8.權利要求7所述的重組微環DNA中的HPV-L1重組片段。

9.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由權利要求8所述HPV-L1重組片段編碼得到。

10.權利要求1所述重組微環DNA的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)設計兩端加BglII和SalI酶切位點的權利要求1的HPV-L1重組片段，并合成，得目的基因；

2)用BglII和SalI同時雙酶切步驟1)的目的基因和ZY781載體，回收，連接，即得親本質粒；

3)用上述親本質粒轉化大腸桿菌ZYCY10P3S2T，過夜培養，質粒酶切及測序驗證插入正確的片段；

4)將上述菌液接入含kana的TB培養液中，37℃培養后與Minicle Induction Mix按等體積混合，于32℃反應5-8h，反應結束后，離心提質粒，即獲得含有權利要求1所述的重組微環DNA；

其中，步驟4)中Minicle Induction Mix的制備方法為：向100ml LB培養基中加入1MNaOH 4ml和20％阿拉伯糖200μl，混合后經0.22μm濾膜過濾。

11.權利要求1所述的重組微環DNA在用于制備預防HPV感染的藥物的用途。

12.權利要求8所述的HPV-L1重組片段在用于制備預防HPV感染的藥物的用途。

13.權利要求9所述的融合蛋白在用于制備預防HPV感染的藥物的用途。

14.一種預防HPV感染的藥物，其特征在于，所述藥物為權利要求1所述的重組微環DNA以及賦予它的藥學的載體。

15.根據權利要求14所述的藥物，其特征在于，所述藥物為核酸疫苗。