[發明專利]一種網織紅細胞檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810185799.4
• 申請日: 2018-03-07
• 公開（公告）號: CN110243651B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 請求不公布姓名;余曉塵;舒家發;李春暉;伍耀嬋;崔曉磊;辛佩軒
• 申請（專利權）人: 深圳市帝邁生物技術有限公司
• 主分類號: G01N1/31
• 分類號: G01N1/31;G01N1/38;G01N21/01;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中細軟知識產權代理有限公司 44528
• 代理人: 安秀梅

本發明公開了一種網織紅細胞檢測試劑盒，包括：染色液和足夠量的稀釋液，所述染色液包括特異性核酸染料和有機溶劑，所述特異性核酸染料為式3所示的化合物：所述稀釋液包括緩沖劑、至少一種表面活性劑和水，所述檢測試劑盒的pH值為7?11；所述表面活性劑包括兩性表面活性劑，所述兩性表面活性劑為咪唑啉型式4所示的化合物；同時公開了該試劑盒用于制備網織紅細胞含量的測定試劑的應用。本發明所用的染料很容易進入被稀釋液處理過的細胞，與分子內部與核酸物質進行結合，染料安全毒性小，使用兩性表面活性劑跟非離子表面活性劑處理細胞，經染料染色后，RET成熟程度區分界限明顯，結果測定準確，同時還可以測定血小板的含量。

技術領域

本發明屬于血細胞分析領域，主要涉及一種網織紅細胞檢測試劑及其應用。所述網織紅細胞檢測試劑盒采用了新型的無毒、高敏感性、高穩定性的核酸染料以及稀釋液，可以準確的對網織紅細胞進行分類。

背景技術

網織紅細胞是紅細胞的一種，介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡階段細胞，其胞質中殘存少量嗜堿性物質RNA，RNA含量越高，網織紅細胞越幼稚。正常人的外周血中都是成熟的紅細胞及少量網織紅細胞(成年人：百分率，0.5％-1.5％，新生兒：百分率，3.0％-6.0％)，因此臨床檢驗可以根據網織紅細胞的成熟度及其含量判斷病人的信息，主要用于判斷貧血類型。

目前，網織紅細胞的檢測方法主要有二種：一種是手工法，一種是儀器法。手工法：由于網織紅細胞胞質中尚有核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質殘存，經煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后，胞質中可見藍或藍綠色枝點狀甚至網織狀結構，從而進行區分。儀器法：主要利用熒光染料與網織紅細胞中的RNA結合，當FCM發出的激光照射于細胞上時，細胞發射出特定顏色的熒光，根據熒光的強弱，測定RNA含量，從而精確測定Ret占成熟紅細胞的百分比(RET％)。還可根據激光照射后發射出的熒光強度或光吸收量大小、光散射量多少等參數的比例關系對RET成熟程度進行分群，將其劃分為低熒光強度網織紅細胞(LFR)、中熒光強度網織紅細胞(MFR)、高熒光強度網織紅細胞(HFR)。熒光強度越高，網織紅細胞越幼稚。手工法，費時較長，效率低，成本較高。因此，儀器法成為臨床上的主要需求。

目前，已有多家廠家對儀器法進行了研究，取得了相應的進展，現有相關技術如下：

現有技術一：中國專利，公開號CN?1172953A，公開了一種用網織紅細胞染色的花青素類型的染料如式1

及使白細胞染色的特異性染料。陽離子表面活性劑做促染劑，在一定緩沖體系下進行測定。此方法不足之處在于多種染料對環境及人體有傷害，同時對異常淋巴細胞血液中，白細胞跟網織紅細胞區分度不是很明顯。另外，RET成熟程度區分界限不是很明顯。

現有技術二：中國專利，公開號CN?101344472A，公開了一種熒光染料如式2

及緩沖劑、促染劑和滲透壓調節劑。此方法不足之處在于此染料對人體有一定的傷害，同時RET成熟程度區分界限不是很明顯。

現有技術三：美國專利，US?5821127公開了一種用聚次甲基蘭作為特異性染料，陽離子和兩性表面活性劑做促染劑。此方法不足之處在于次染料對紅細胞有非特異性染色，背景強度較大，且RET成熟程度區分界限不是很明顯。

綜上所述，現有的發明專利中還存在許多不足之處，比如染料的危害，穩定性，對紅細胞有非特異性染色，RET成熟程度區分界限不是很明顯，試劑成本高，制備復雜等，因此需要對現有技術進一步改進。

發明內容

本發明的目的在于：鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種網織紅細胞檢測試劑盒，此試劑盒中的核酸染料具有無毒、高敏感性、高穩定性的特點。