[發明專利]接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜及細菌檢測的方法

在審

• 申請號: 201810178378.9
• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108646017A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 王棟;魯振坦;余振國;張佳琪;王雯雯
• 申請（專利權）人: 武漢紡織大學
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N21/64
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

a)制備表面活化的納米纖維膜：取納米纖維膜浸漬于氫氧化鈉溶液中活化處理得到表面活化的納米纖維膜；

b)制備表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜：取步驟a)得到的所述表面活化的納米纖維膜與溴異丁酰溴反應得到表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜；

c)制備表面接枝甘露糖聚合物的納米纖維膜：取步驟b)得到的所述表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜與甘露糖單體發生接枝共聚反應，制備得到表面接枝甘露糖聚合物的納米纖維膜；

d)制備異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液；

e)制備大腸桿菌檢測膜：取步驟c)得到的所述表面接枝甘露糖聚合物的納米纖維膜浸漬于步驟d)的所述異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液中，制備得到大腸桿菌檢測膜。

2.根據權利要求1所述接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟c)的具體反應過程如下：

所述表面具有引發原子轉移自由基的納米纖維膜與溴化亞銅混合后，在惰性氣體環境中，與甘露糖單體、二聯吡啶的甲醇混合液，在80℃的恒溫水浴下振蕩反應10～20h，制備得到表面接枝甘露糖聚合物的納米纖維膜。

3.根據權利要求2所述接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟c)中，所述溴化亞銅與甘露糖單體、二聯吡啶之間的物質的量之比為0.5～2:50～200:0.5～2。

4.根據權利要求1所述接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟d)的異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液的制備過程如下：

取異硫氰酸熒光素和牛血清蛋白混合后置于水中，所述異硫氰酸熒光素與牛血清蛋白的質量比為4～8:100，控制溫度為4℃，攪拌反應4～6h，去除未反應完全的異硫氰酸熒光素后調節溶液的pH為7～9，得到被異硫氰酸熒光素標記的牛血清蛋白水溶液。

5.根據權利要求1所述接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟e)的具體反應過程如下：

取步驟c)得到的所述表面接枝甘露糖聚合物的納米纖維膜浸漬于步驟d)的所述異硫氰酸熒光素的牛血清蛋白溶液中，控制溫度為4℃，反應10～20min，取出，采用清水洗滌至少2次，干燥后制備得到大腸桿菌檢測膜。

6.根據權利要求1所述接枝共聚制備大腸桿菌檢測膜的方法，其特征在于：所述步驟a)中，所述納米纖維膜的厚度為100～300μm，克重為12～40gsm，所述納米纖維膜的材質為聚乙烯-聚乙烯醇。

7.一種接枝共聚制備的大腸桿菌檢測膜，其特征在于：它為權利要求1～6中任意一項所述的制備方法制備得到。

8.一種檢測大腸桿菌的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

1)選用所述權利要求7的大腸桿菌檢測膜；

2)將所述步驟1)的檢測膜浸入待測溶液中；

3)待5分鐘后觀察膜的顏色，通過肉眼觀察膜顏色的變化來判斷細菌的濃度：若膜顏色為無色，細菌的總數大于10⁵CFU/mL；若膜顏色為淺黃綠色，細菌的總數為10³～10⁴CFU/mL；若膜顏色為深黃綠色，細菌的總數為10～10³CFU/mL；若膜顏色在黃綠色基礎上顯橙色，細菌的總數為小于10CFU/mL。

9.根據權利要求8所述檢測大腸桿菌的方法，其特征在于：定量檢測的方法包括如下步驟：

4)選用權利要求7制備的檢測膜；

5)取待測溶液，測定其熒光強度值，然后將所述步驟4)的檢測膜浸漬于待測溶液中，在5分鐘以內的每相等的時間間隔之間測定待測溶液的熒光強度值，由前后變化的數值計算熒光強度變化速率；

6)將所述步驟5)的熒光強度變化速率代入標準曲線中，得到待測樣品的細菌濃度值。

10.根據權利要求9所述檢測大腸桿菌的方法，其特征在于：所述步驟6)中的標準曲線為大腸桿菌標準溶液中的熒光強度變化速率與細菌濃度對數值之間的線性關系圖。