[發(fā)明專利]抗CD3的納米抗體CD3/Nb47及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810175857.5
• 申請(qǐng)日: 2018-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN110218255B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧小玲;楊曉梅;段斯亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京格允知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11609
• 代理人: 周嬌嬌;李亞東

本發(fā)明公開了抗CD3的納米抗體CD3/Nb47及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的納米抗體，包含決定簇互補(bǔ)區(qū)和框架區(qū)；所述納米抗體的決定簇互補(bǔ)區(qū)由CDR1、CDR2和CDR3組成；通過本發(fā)明所公布的納米抗體核苷酸序列及宿主細(xì)胞，該納米抗體能夠在大腸桿菌內(nèi)高效表達(dá)，應(yīng)用于CD3分子檢測試劑的研發(fā)，制備腫瘤抑制劑或腫瘤細(xì)胞抑制劑以及制備抑制CD3活性和促進(jìn)T細(xì)胞增殖的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中抗CD3的納米抗體CD3/Nb47及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

CD3分子是T細(xì)胞膜上的重要分化抗原,是成熟T細(xì)胞的特征性標(biāo)志。它與T細(xì)胞表面受體TCR形成復(fù)合物，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著重要作用。CD3抗體可特異性地識(shí)別T細(xì)胞表面CD3分子，引起T細(xì)胞TCR-CD3復(fù)合體的交聯(lián)，直接產(chǎn)生活化信號(hào)，導(dǎo)致T細(xì)胞活化并增殖。目前研究表明，CD3抗體在腫瘤治療中有重要的作用。

但是，抗體藥物應(yīng)用存在很多問題，比如研發(fā)周期長，生產(chǎn)成本過高；難以大規(guī)模生產(chǎn)；穩(wěn)定性差易降解，貯存成本高；容易被污染，維護(hù)成本費(fèi)用高昂；并具有免疫原性等，限制了其在臨床上的應(yīng)用范圍。

納米抗體技術(shù)，是生物醫(yī)學(xué)科學(xué)家在傳統(tǒng)抗體的基礎(chǔ)上，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合納米粒子科學(xué)的概念進(jìn)行的抗體工程革命，從而研發(fā)出的最新和最小的抗體分子。1993年Hamers等報(bào)道，駱駝體內(nèi)存在著天然缺失輕鏈和重鏈恒定區(qū)1(CH1)的重鏈抗體，克隆其可變區(qū)得到只由一個(gè)重鏈可變區(qū)組成的單域抗體，稱為VHH(variable domain of heavychain of heavy-chain antibody)，現(xiàn)已被重新命名為“納米抗體”(nanobody，Nb)。納米抗體具有完整功能的最小的抗原結(jié)合片段，其晶體結(jié)構(gòu)呈橢圓形，直徑2.5nm，長4nm。Nb具有許多獨(dú)特的性質(zhì)，很適合進(jìn)行基因改造，在疾病的精確診斷和靶向治療等方面展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。納米抗體在化學(xué)組成和形狀上比抗體簡單許多，不具有化學(xué)疏水性，其抗熱性和抗酸堿性更強(qiáng)，更容易相互結(jié)合或與其他化合物結(jié)合，能被單基因編碼，容易用微生物合成。納米抗體對(duì)環(huán)境具有良好的耐受性，具備高度的構(gòu)象穩(wěn)定性，而且分子質(zhì)量更小，臨床的治療效果更好，同時(shí)這些小蛋白分子更容易合成，價(jià)格也更低。納米抗體的獨(dú)特的性質(zhì)，使其在疾病的精確診斷和免疫靶向治療等方面展現(xiàn)了更為廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，如何制備有效治療腫瘤的藥物。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了納米抗體。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種納米抗體，稱為CD3/Nb47，該納米抗體包含決定簇互補(bǔ)區(qū)CDR和框架區(qū)FR；所述納米抗體的決定簇互補(bǔ)區(qū)CDR由CDR1、CDR2和CDR3組成；所述CDR1的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.8的第23-32位氨基酸；所述CDR2的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.8的第49-57位氨基酸；所述CDR3的氨基酸序列為序列表中SEQ IDNo.8的第95-112位氨基酸。

優(yōu)選地，該納米抗體的框架區(qū)FR由FR1、FR2、FR3和FR4組成；其中所述FR1的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.8的第1-22位氨基酸；所述FR2的氨基酸序列為序列表中SEQ IDNo.8的第33-48位氨基酸；所述FR3的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.8的第58-94位氨基酸；所述FR4的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.8的第113-123位氨基酸。

優(yōu)選地，所述納米抗體的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.8所示。