[發明專利]利用二硫化鉬量子點內濾效應熒光檢測堿性磷酸酶活性的方法

有效

• 申請號: 201810166069.X
• 申請日: 2018-02-28
• 公開（公告）號: CN108414482B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 易濤;鐘亞平;薛峰峰;魏鵬;李若涵;曹春艷
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;陸尤

1. 一種二硫化鉬量子點的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：以二硫化鉬粉末為原料，將其溶于乙醇/水混合溶液中，加入無機堿后置于超聲清洗器中超聲5-20 h，調節pH到中性；將得到的混合溶液離心，保留上層清液，用去離子水透析24 h后冷凍干燥，重新分散到水溶液中，即得到熒光二硫化鉬量子點溶液；該二硫化鉬量子點的直徑在5 nm以下，其熒光激發波長為360 nm~500nm，熒光發射波長為480 nm~556 nm；

所述無機堿為氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀。

2.根據權利要求1所述的二硫化鉬量子點的制備方法，其特征在于，所述乙醇/水混合溶液中，按體積計，乙醇/水為15%–85%，二硫化鉬粉末在溶液中濃度為4.5 mg/mL–18 mg/mL，無機堿加入量與二硫化鉬粉末的重量比例為0.06:1–8:1。

3.一種利用二硫化鉬量子點內濾效應熒光檢測堿性磷酸酶活性的方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）采用權利要求1-2之一所述方法制備最佳激發波長在400nm處的二硫化鉬量子點溶液，配置二硫化鉬量子點溶液濃度為100 ug/mL–400 ug/mL；

（2） 將不同活性的堿性磷酸酶溶液加入到含有過量的4–硝基苯磷酸二鈉鹽以及硫酸鎂的堿性緩沖液中，進行共孵育，生成對硝基苯酚；

（3）將上述步驟（2）得到的溶液加入二硫化鉬量子點溶液中，進一步進行共孵育；

（4）根據含有不同濃度的堿性磷酸酶溶液在500nm處的熒光強度的不同，建立線性關系，得到檢測堿性磷酸酶的標準工作曲線；

（5）將含有堿性磷酸酶的待測樣品加入到與標準工作溶液含量相同的熒光二硫化鉬量子點溶液中，檢測反應體系在500 nm處的熒光強度的變化，根據標準曲線方程得到待測溶液中堿性磷酸酶的活性。

4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述共孵育溫度為20~50℃，共孵育時間為30~60 min。

5. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述共孵育溫度為20~50℃，共孵育時間為5~10 min。

6. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（4）中，檢測堿性磷酸酶的標準工作曲線的具體過程如下：配制相同體積的一系列不同活性的堿性磷酸酶溶液加入到含有PNPP和硫酸鎂的堿性緩沖液中，孵育一段時間后加入到二硫化鉬量子點溶液中；用熒光光度計記錄400 nm激發波長下，反應體系在500 nm發射峰處的熒光強度，并以磷酸酶標準溶液的活度為橫坐標，500 nm處反應體系的熒光強度的變化值為縱坐標，擬合得到堿性磷酸酶標準曲線。

7. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（5）中，利用二硫化鉬量子點內濾效應熒光檢測堿性磷酸酶活性的范圍是0.1~5 U/L。

8.一種由權利要求3-7之一所述的檢測堿性磷酸酶活性的方法構建的探針。

9.如權利要求8所述的探針在堿性磷酸酶抑制劑中的應用。