[發明專利]一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法

在審

• 申請號: 201810164032.3
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108522269A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 侯思宇;孫朝霞;韓淵懷
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01G22/00
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572
• 代理人: 段宇

本發明涉及一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，屬于作物遺傳育種技術領域，提供了一種利用化學誘變的方法定向篩選蘆丁含量變化突變體，方法簡便易行，成功率高的獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，采用的技術方案為選擇誘變親本利用EMS化學誘變的方法對種子進行誘變處理，然后在利用高效液相色譜法定向篩選蘆丁含量變化突變體，獲得了穩定表達的高（低）蘆丁苦蕎種質，該方法簡便易行，成功率高，開拓了苦蕎育種領域，豐富了苦蕎種質資源。

技術領域

本發明涉及一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，屬于作物遺傳育種技術領域。

背景技術

苦蕎（tartary buckwheat）是一種藥食兼用型作物。其籽粒富含多種對人體有益的氨基酸，維生素及礦物質，是糖尿病的輔助治療食品，其所含的豐富的黃酮類物質，尤其是蘆丁（rutin）在保護心腦血管、清除自由基、抗氧化、抗衰老方面都有極佳的功效。蘆丁的來源現主要為槐米，蘆丁含量可達10%-28%，可槐米產量，尤其是其中蘆丁含量受氣候、采收、晾曬條件等影響較大，導致槐米售價不穩定。隨著我國人民生活的提高，對蘆丁以及其制成的藥品需求不斷增加，拓寬蘆丁來源物種，開發不同組織（如葉片、籽粒等）提取物，篩選高蘆丁含量品系等都將成為有效的手段。

隨著健康中國觀念的提出，苦蕎中豐富的蘆丁含量及其保健功能日漸被人重視。苦蕎目前主要的食用方法均以籽粒為主，有苦蕎茶和苦蕎粉等。苦蕎雜交制種困難一直是苦蕎育種的瓶頸。

發明內容

為解決現有技術存在的技術問題，本發明提供了一種利用化學誘變的方法定向篩選蘆丁含量變化突變體，方法簡便易行，成功率高的獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，按照以下步驟進行操作，

a、選擇誘變親本‘黑豐1號’，該品種為山西省主栽品種，生產性狀較好，將50000粒種子浸泡于蒸餾水中，分兩份放置于4L礦泉水桶內，振蕩過夜；

b、將蕩過夜后的種子控干水分，然后利用甲基磺酸乙酯溶液對種子進行化學誘變處理，處理完成，在室溫條件下，通風櫥內以300rpm/min進行振蕩，振蕩過夜8-10h，期間輕輕攪動數次；

c、振蕩結束后取下處理種子的桶，放置2min，加入等體積配制好的0.2 M 硫代硫酸鈉上下顛倒混勻，中和靜置15min；

d、用濾網器過濾掉中和過的EMS水溶液，廢液倒入通風櫥的下水中，加1L蒸餾水沖洗5次，每次將水用濾網器過濾干凈，直到流出的溶液沒有泡沫狀；

e、將所處理的種子傾倒于濾網中，并用塑料袋兜住底部，從通風櫥取出后放在洗池中，用流水沖洗5min，空中掛置控干水分，備播；

f、土地旋耕、平整后，將誘變后的種子進行行播：行距30cm開溝，開溝深度5-10cm，每行播30粒種子，第20天統計出苗率，出苗率=出苗數/種子總數×100%，出苗率在30-50%，表示誘變有效；待長出真葉后直至收獲，持續統計變異單株，計算變異率，變異率=表型變異數/成苗總數×100%；表型變異統計主要依據為：葉色變異、株型變異、花色變異、花期變異、籽粒顏色變異、籽粒形態變異；

g、單株收獲M1代籽粒，單株收獲M1代突變體，隨機選取1000個單株，高效液相色譜法測定每一單株籽粒的蘆丁含量，獲得潛在高蘆丁突變株系共20個；

h、第二年繼續種植上述突變體，并分別種植于兩個緯度不同地塊，每一地塊每一株系各種植10個單株，共收獲單株400個；高效液相色譜法分別測定各單株蘆丁含量，獲得在不同地塊都高蘆丁含量的株系16個；

i、繼續上述方法持續跟蹤篩選直至M5代，獲得穩定遺傳高蘆丁含量突變體6個，其中高蘆丁突變體2個，低蘆丁突變體4個。