[發明專利]一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法

在審

• 申請號: 201810164032.3
• 申請日: 2018-02-27
• 公開（公告）號: CN108522269A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 侯思宇;孫朝霞;韓淵懷
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01G22/00
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572
• 代理人: 段宇

1.一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，其特征在于：按照以下步驟進行操作，

a、選擇誘變親本‘黑豐1號’，該品種為山西省主栽品種，生產性狀較好，將50000粒種子浸泡于蒸餾水中，分兩份放置于4L礦泉水桶內，振蕩過夜；

b、將蕩過夜后的種子控干水分，然后利用甲基磺酸乙酯溶液對種子進行化學誘變處理，處理完成，在室溫條件下，通風櫥內以300rpm/min進行振蕩，振蕩過夜8-10h，期間輕輕攪動數次；

c、振蕩結束后取下處理種子的桶，放置2min，加入等體積配制好的0.2 M 硫代硫酸鈉上下顛倒混勻，中和靜置15min；

d、用濾網器過濾掉中和過的EMS水溶液，廢液倒入通風櫥的下水中，加1L蒸餾水沖洗5次，每次將水用濾網器過濾干凈，直到流出的溶液沒有泡沫狀；

e、將所處理的種子傾倒于濾網中，并用塑料袋兜住底部，從通風櫥取出后放在洗池中，用流水沖洗5min，空中掛置控干水分，備播；

f、土地旋耕、平整后，將誘變后的種子進行行播：行距30cm開溝，開溝深度5-10cm，每行播30粒種子，第20天統計出苗率，出苗率=出苗數/種子總數×100%，出苗率在30-50%，表示誘變有效；待長出真葉后直至收獲，持續統計變異單株，計算變異率，變異率=表型變異數/成苗總數×100%；表型變異統計主要依據為：葉色變異、株型變異、花色變異、花期變異、籽粒顏色變異、籽粒形態變異；

g、單株收獲M1代籽粒，單株收獲M1代突變體，隨機選取1000個單株，高效液相色譜法測定每一單株籽粒的蘆丁含量，獲得潛在高蘆丁突變株系共20個；

h、第二年繼續種植上述突變體，并分別種植于兩個緯度不同地塊，每一地塊每一株系各種植10個單株，共收獲單株400個；高效液相色譜法分別測定各單株蘆丁含量，獲得在不同地塊都高蘆丁含量的株系16個；

i、繼續上述方法持續跟蹤篩選直至M5代，獲得穩定遺傳高蘆丁含量突變體6個，其中高蘆丁突變體2個，低蘆丁突變體4個。

2.根據權利要求1所述的一種獲得高蘆丁含量苦蕎種質創制的方法，其特征在于：所述步驟b中進行化學誘變處理時，預先配置終濃度為0.5%和0.8%的甲基磺酸乙酯溶液，用PBS磷酸緩沖液配置，PH值為7.0；然后再分別利用兩種濃度的甲基磺酸乙酯溶液對種子進行處理，每個濃度處理25000粒種子。