[發明專利]一種鑒別滇重樓正品及不同基因型的試劑盒、鑒別方法有效
| 申請號： | 201810159772.8 | 申請日： | 2018-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN108265123B | 公開（公告）日： | 2021-06-25 |
| 發明（設計）人： | 尹鴻翔;唐卓;張開元;陳蓉 | 申請（專利權）人： | 成都中醫藥大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 張娟;劉華玲 |
| 地址： | 610000 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 重樓 正品 不同 基因型 試劑盒 鑒別方法 | ||
1. 一種鑒別滇重樓正品及不同基因型的試劑盒，其特征在于：它包含2對引物，即SEQID NO：1～2所示的引物對1，SEQ ID NO：3～4所示的引物對2；所述不同基因型為YN-I和YN-II。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：它還包括Taq DNA聚合酶、dNTP和反應緩沖液。
3.一種鑒別滇重樓正品及不同基因型的方法，其特征在于，步驟如下：
a、提取樣本DNA：提取待檢樣本的DNA；
b、基因擴增：用權利要求1或2所述的試劑盒對待檢樣本的DNA進行PCR擴增；
c、結果檢測：對DNA擴增結果進行檢測；
所述不同基因型為YN-I和YN- II。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟b中，所述PCR擴增的體系為：
總體積為25μl時：
10×Taq buffer 2.5ul，dNTPmixture 280 μM，模板10～90ng，Taq DNA聚合酶1.5 U，
SEQ ID NO：1～4引物的用量分別為0.25μM、0.15μM、0.2μM、0.25μM，其余為ddH2O。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：模板用量為30ng。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟b中，所述PCR擴增的條件為：
94℃預變性5min；
94℃變性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s；26～32個循環；
72℃延伸5 min。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：步驟b中，所述循環的次數為26或27次。
8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟c中，所述檢測采用的方法為凝膠電泳。
9.權利要求1或2所述的試劑盒、權利要求3-8任意一項所述的方法在鑒別滇重樓不同基因型中的用途；
所述不同基因型為YN-I和YN- II。
10.權利要求1或2所述的試劑盒、權利要求3-8任意一項所述的方法在鑒別滇重樓及其混偽品中的用途；所述混偽品為七葉一枝花、多葉重樓
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