[發明專利]一種抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體及制備方法與應用

在審

• 申請號: 201810157564.4
• 申請日: 2018-02-24
• 公開（公告）號: CN108440667A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 趙肅清;肖益熱;鄭希;王甜甜;陳莉莉;賀攀
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/02;A61K39/40;A61P31/04;A61P35/00;A61P1/04
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

1.一種抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于包含如下步驟：

培養幽門螺旋桿菌，提取幽門螺旋桿菌脂多糖；將幽門螺旋桿菌脂多糖和佐劑混合制成抗原，對蛋雞進行初次免疫和加強免疫，加強免疫共計3～5次；從第一次加強免疫開始，收集雞蛋，分離，得到抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體。

2.根據權利要求1所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

所述的幽門螺旋桿菌脂多糖的制備方法，包含如下步驟：

(1)將幽門螺旋桿菌菌苔洗滌后，用水混懸，反復凍融至菌體裂解，得到裂解液；將裂解液與質量分數為90％的苯酚溶液分別預熱至67.5～68.5℃后混合，67.5～68.5℃劇烈攪拌30～60min，得到混合液；將混合液冰浴至4℃以下，離心，得到酚相；

(2)步驟(1)制得的酚相加等體積無熱原水洗滌，收集水相透析去除苯酚；濃縮；然后加入DNase和RNase酶解，沸水浴使酶失活，冷卻后離心，棄沉淀，收集上清，加入丙酮沉淀，得到幽門螺旋桿菌脂多糖。

3.根據權利要求1所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

所述的免疫的具體操作為：

選取20周齡產蛋母雞；初次免疫使用弗氏完全佐劑和幽門螺旋桿菌脂多糖等體積混合，采用皮下多點注射的免疫方式對每只母雞注射；初次免疫兩周后進行第一次加強免疫，使用弗氏不完全佐劑和脂多糖等體積混合，采用皮下多點注射的免疫方式對每只母雞注射，以后每隔15天進行加強免疫一次，一共加強免疫3～5次，從第一次加強免疫開始收集免疫雞蛋。

4.根據權利要求1所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

所述的幽門螺旋桿菌脂多糖的初始濃度為0.5～1mg/mL。

5.根據權利要求1所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

所述的分離的具體操作為：

分離所收集的雞蛋的卵黃，加入無水乙醇脫水，減壓干燥得到粗品抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體，或者將卵黃進一步純化，得到成品抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體。

6.根據權利要求1所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

所述的純化的具體操作為：

(1)用6～9倍卵黃體積的水溶解稀釋卵黃，20～40℃攪拌30min～2h，得到溶解液；然后加入硅藻土和0.6～1.3倍溶解液體積的乙醇，調節pH至6.5～7.5，攪拌30min～1h，過濾棄去殘渣，得到清液；

(2)向步驟(1)制得的清液中加入硅藻土和1.5～2.5倍溶解液體積的乙醇，調節pH值至5.0～5.4，攪拌30min～1h，過濾棄去上清液，得到固體組分；在固體組分中加入6～9倍固體組分質量的水溶解，20～40℃攪拌30min～2h，過濾棄去殘渣，得到清液；

(3)將步驟(2)制得的清液超濾濃縮，干燥，得到抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體。

7.根據權利要求6所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的硅藻土的用量為按溶解液計終濃度5～20g/L。

8.根據權利要求6所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體的制備方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的硅藻土的用量為按溶解液計終濃度5～20g/L。

9.一種抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體，其特征在于通過權利要求1～8任一項所述的制備方法制備得到。

10.權利要求9所述的抗幽門螺旋桿菌脂多糖的卵黃抗體在制備預防或治療胃潰瘍和胃癌產品中的應用。