[發明專利]一種龜背竹組織培養的方法

有效

• 申請號: 201810142422.0
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN108184670B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 覃偉杰
• 申請（專利權）人: 臺州中知英健機械自動化有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西中知科創知識產權代理有限公司 45130
• 代理人: 陸麗婷

1.一種龜背竹組織培養的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（一）外植體的預處理：剪取龜背竹的莖頂或者腋芽作為外植體，將外植體剪成 4-6cm的條狀物，然后用70%酒精將外植體浸泡3-5s，然后置于1-1.5%次氯酸鈉溶液中浸泡15-30min，浸泡過程不斷進行振蕩，浸泡完成后用無菌水將外植體沖洗 4-6 次，然后放置于無菌接種盤吹干其表面水分，切去葉片以及舊的切口，切成 2-2.5cm 帶 2-3 個芽的莖段，將帶芽莖段置于自來水下沖洗 30min，用濾紙吸干帶芽莖段備用；

（二）培養基的培養：

（1）誘導培養：將上述步驟獲得的帶芽莖段先接種到誘導培養基上，黑暗條件下培養5-10天，然后按光照和黑暗時間比為 2:1 交替進行誘導培養，誘導新芽長高至 4-5cm 后，將新芽的葉片切去，切成 2-3cm 的莖段；

所述誘導培養基含有 MS+1.5mg/L KT +0.5mg/L 6-BA +0.1mg/L IBA +4.5g/L 瓊脂+30g/L 蔗糖；

（2）增殖培養：將步驟（1）培養后處理得到的莖段接種到增殖培養基上培養 35-40 天后，將新芽轉到新的增殖培養基培養，增殖倍數達到 3-4 倍；

所述增殖培養基的成分為：MS+1.0mg/L KT +0.2mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA+3.5g/L 瓊脂+25g/L 蔗糖；

（3）生根培養：將經步驟（2）增殖培養得到的叢芽切除其多余的側面芽或不定芽，按照高度為 1.5-3cm 將具有單芽的小枝剪切下來，然后將剪切后的小枝放到生根培養基進行生根培養，培養 20-25 天后即可出瓶煉苗；

所述生根培養基的成分為：1/2 改良 MS＋ 0.1-1mg/L IBA+1.5-2.0mg/L 生根粉+4-4.5g/L 瓊脂+25-30g/L 白糖；

（三）大棚煉苗：用鑷子將小苗從培養器皿中取出，用自來水將小苗根部的培養基洗凈，然后種植到培養土苗盤里并噴淋定根水，待葉面干后，噴施 800-1000 倍液的百菌清，7-15天后噴施 20-30 倍的沼液，在大棚內培育 3-5 個月后進行移栽；

所述組織培養方法還包括生根苗移栽的步驟，具體為：煉苗 20-30 天待根系由白色轉變成灰白色后，將生根苗進行移栽，移栽時先將生根苗置于清水中漂洗，洗凈根部的培養基，然后將生根苗浸泡于生根劑中 5-10 分鐘，再將生根苗栽入裝有混合基質的容器中培養，所述混合基質是由體積比為 1：1-2：2-3 的蛭石粉、風化煤與米糠混合而成；

所述步驟（3）中改良 MS 包括 30-45 重量份的常量營養元素、0.3-0.6 重量份的微量營養元素和 5-10 重量份的有機試劑；所述常量營養元素的組分和其對應的濃度為： 復硝酚鈉 150-200mg/L、硫酸銨 160-210mg/L、七水硫酸鎂320-390mg/L 和油菜素甾醇 30-80mg/L；所述微量營養元素的組分和其對應的濃度為： 硫酸錳 15-18mg/L、硼酸 2-4mg/L、碘化鉀 1-2mg/L、鉬酸鈉0.2-0.4mg/L、氯化鈷 0.05-0.08mg/L 和五水合硫酸銅 0.02-0.03mg/L；所述有機試劑的組分和其對應的濃度為：甘氨酸 1-3 mg/L、煙酸 1-3 mg/L、鹽酸吡哆醇 1-2mg/L、肌醇 102-112 mg/L。

2.根據權利要求 1 所述的一種龜背竹組織培養的方法，其特征在于，所述步驟（1）誘導培養的條件為：培養溫度為 23-27℃，濕度為 68-82%，PH 值為 5.6-6.0，是先進行暗培養 4-5 天，再轉入光培養，其中，光培養的光照強度為 1500-2000Lux，光照時間為每天12-14h。

3.根據權利要求 1 所述的一種龜背竹組織培養的方法，其特征在于，所述步驟（2）增殖培養是在溫度為 25-30℃，濕度為 50-75%，PH 值為 5.6-6.0 的條件下進行的，所述增殖培養光照強度為 1800-2200Lux，光照時度為 10-15h/天。

4.根據權利要求 1 所述的一種龜背竹組織培養的方法，其特征在于，所述步驟（3）生根培養的條件為：光照強度 2000-2500Lux，光照時間 10-13 小時/d，溫度 25-30℃。