[發明專利]一種質粒提取方法

在審

• 申請號: 201810142011.1
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN108048456A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 徐宇虹;陳鳴曉
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

1.一種質粒提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將含有質粒的菌體裂解液上樣第一層析柱，使用第一溶液進行洗脫，收集含有質粒的洗脫液，獲得第一洗脫液；其中，所述第一層析柱填料為瓊脂糖凝膠6FF；

(2)將所述第一洗脫液上樣第二層析柱，使用第二溶液進行洗脫，收集含有質粒的洗脫液，獲得第二洗脫液；其中，所述第二層析柱填料為瓊脂糖珠與固定在瓊脂糖珠上的2-巰基吡啶配體；

(3)將所述第二洗脫液上樣第三層析柱，使用第三溶液進行洗脫，收集含有質粒的洗脫液，獲得第三洗脫液；其中，所述第三層析柱填料為葡聚糖；

(4)將所述第三洗脫液上樣第四層析柱，使用第四溶液洗脫，收集含有質粒的洗脫液，獲得第四洗脫液；其中，所述第四層析柱填料為帶有季銨基團單苯乙烯/二乙烯基苯珠粒。

2.一種根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，所述第四溶液為1.0M NaCl,10mM EDTA,100mM Tris-HCl,pH 7.5。

3.根據權利要求2所述的質粒提取方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，所述第四溶液洗脫為線性梯度洗脫。

4.根據權利要求3所述的質粒提取方法，其特征在于，所述線性梯度洗脫為流動相中的第四溶液的含量由0％升至100％。

5.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，在將所述第三洗脫液上樣第四層析柱之前，使用第五溶液平衡所述第四層析柱；其中，所述第五溶液為10mM EDTA,100mMTris-HCl,pH 7.5。

6.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，所述第三層析柱的徑高比為13:40-13:60。

7.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，上樣量為所述第一層析柱填料體積的20％-40％。

8.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，所述第一溶液為2.1M(NH4)2SO4,10mM EDTA,100mM Tris,pH 7.5。

9.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，所述第二溶液為0.3M NaCl,1.7M(NH4)2SO4,10mM EDTA,100mM Tris-HCl,pH 7.5。

10.根據權利要求1所述的質粒提取方法，其特征在于，所述第三溶液為10mM EDTA,100mM Tris-HCl,pH 7.5。